ブリの生殖腺刺激ホルモン遺伝子のクローニングと成熟促進法の開発

黄尾促性腺激素基因的克隆及促成熟方法的开发

• 批准号: 01F00121
• 负责人: 松山 倫也
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01F00121/
• 关键词: ブリ; 生殖腺茂樹ホルモン(GtH); 成熟促進; 組み換えGtH; 種苗生産; 人工種苗

ブリ養殖のための種苗は、現在においても全てを天然稚魚(モジャコ)に依存している。本研究では、養成親魚を用いたブリの人工種苗の生産を最終的な目標として、飼育下で成熟させるのに必要な2種の生殖腺刺激ホルモン(GtH)の遺伝子クローニングを行い、遺伝子工学的手法を用いたブリのGtHの大量合成法を開発するとともに,大量に得られるこれら組み換えGtHを用いて,それらの機能解析を行う。今回、ブリの2種類の生殖腺刺激ホルモン(GtH)のcDNAクローニングを行い、βサブユニットのmRNAの発現をマーカーとして、配偶子の成長、成熟に伴うGtHの分泌動態を解析した。ブリの下垂体からα、1β、および2βの3つのサブユニット遺伝子が単離され、ブリでも他の脊椎動物と同様に2種類のGtHを下垂体で産生していることが明かとなった。それらの塩基数はα:579bp、GtH-1β:453bp、およびGtH-2β:578bpでそれぞれ114、120、および148のアミノ酸をコードしていた。GtH-1の分泌はGtH-1のβ-サブユニットのmRNA発現量、GtH-2の分泌はGtH-2のβ-サブユニットのmRNA発現量にそれぞれ依存していると考えられる。そこで雌雄各時期における各GtHサブユニットのmRNA発現量をノーザンブロッティング法により解析した。その結果、雌においてGtH-1β-サブユニットは卵黄形成の活発な時期に、GtH-2β-サブユニットは卵黄形成の後半から卵成熟直前にそれぞれ高い発現を示した。雄ではGtH-1とGtH-2のそれぞれのβ-サブユニットの発現量はともに活発な精子形成の見られる期間中、高い値を示したが、一連の精子形成過程中、常にGtH-1βの方がGtH2βより4倍程度高い値を示した。以上、本研究により、特に雌における卵黄形成にGtH-1が積極的に関与していることが示唆された。

The population is growing and the seedlings are growing. Now, the whole population is naturally young and dependent on each other. In this study, the artificial seedlings were used in this study. In this study, the artificial seedlings were used to produce the most popular drugs, and it was necessary to stimulate the gonad in mature seedlings (GtH). In this study, the artificial seedlings were used in this study, and the artificial seedlings were used in this study. in this study, the artificial seedlings were used in this study, and the mature seedlings were reared in the most mature plants. the gonad stimulation (GtH) was used in this study, and the techniques of engineering and engineering were used in this study. The machine is able to parse the bank. This time, gonad stimulation (GtH), cDNA gonadal stimulation (GtH), β-gonadal stimulation (β-gonadal stimulation, gonadal stimulation), β-gonadal stimulation (β-gonadal stimulation, gonadal stimulation), β-gonadal stimulation, gonadal stimulation, gonadal stimulation The pituitary glands, alpha, 1 β, 2 β, 3 β, 1 β, 1 β, 2 β, 3 β, 1 β, 2 β, 3 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 1 β, 1 β, 1 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 β, 1 β, 1 β, 1 β, 1 β, 1 β, 2 β, 1 β, 1 The cardinal numbers are: 579bp, GtH-1 β: 453bp, GtH-2 β: 578bp1, 114,120,148,148,148,148,148,148,148,148,148,148,148,148,148,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,114,148,148,148,148,148,148,148,148,148,148,148,148,148,148,148,148,148,148,148, GtH-1 secretes GtH-1 β-adrenaline and GtH-2 secretes GtH-2 β-adrenaline. GtH-2 secretes β-globulin and mRNA. Every GtH in each period of time was checked by both sexes. The mRNA was measured, and the results were analyzed by the method of scanning. The results showed that the egg yolk formation of the female was significantly higher than that of the female, and the egg yolk formation of the female was significantly higher than that of the GtH-1 β-yolk formation. The results showed that the egg yolk formation was not detected in the female and GtH-2 β-yolk formation. In male, GTH-1, GtH-2, GtH2, β, β, GtH2, β, β, GtH2, β, respectively. In this study, the formation of GtH-1 yolk and the formation of egg yolk in this study showed that the yolk was positive and instigated.

项目成果

Rahman, M.A., K.Ohta, M.Yoshikuni, Y.Nagahama, H.Chuda, M.Matsuyama: "Characterization of ovarian membrane receptor for 17,20β-dihydroxy-4-pregne-3-one, a maturation-inducing hormone in yellowtail (Seriola quinqueradiata)"Gen. Comp. Endocrinol. 127. 71-79

Rahman, M.A.、K.Ohta、M.Yoshikuni、Y.Nagahama、H.Chuda、M.Matsuyama：“17,20β-二羟基-4-孕-3-酮（一种成熟诱导激素）卵巢膜受体的表征黄尾鱼（Seriola quinqueradiata）“Gen. Comp. Endocrinol. 127. 71-79

Ohta, K., M.A.Rahman, H.Chuda, M.Yoshikuni, N.Yoshitaka, M.Matsuyama: "Maturation-inducing hormone and its membrane receptor in gonads of Japanese yellowtail, Seriola quinqueradiata"Fisheries Science. 68. 686-689 (2002)

Ohta, K.、M.A.Rahman、H.Chuda、M.Yoshikuni、N.Yoshitaka、M.Matsuyama：“日本鰤鱼性腺中的成熟诱导激素及其膜受体”渔业科学。