卵質を決定する分子機構に関する研究

决定鸡蛋品质的分子机制研究

基本信息

批准号：
15658059
负责人：
松山倫也
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

卵質低下の中でも、卵巣腔内に排卵された卵(排卵卵)の受精率が滞留時間に伴い急激に低下する「排卵後過熟」に焦点を絞り、その細胞学的要因を明らかにすることを目的として研究を進めた。本年度は養殖対象種として再現実験を行い易いマサバと、モデル動物としてゼブラフィッシュを用いて、排卵後過熟とMPF活性および紡錘体の形態について調べた。マサバはhCG(500IU/Kg)を投与することにより33時間後に排卵させ、排卵後0,3,6,12,18,24,30および36時間後の排卵卵を採取し、人工授精を行い受精率、孵化率を調べた。MPF活性は[γ-^<32>P]ATPを用い、リン酸基のヒストンH1への取り込みによって測定した。一方、ゼブラフィッシュは、排卵後0および7.5時間の排卵卵を用いて、受精率、孵化率、MPF活性を測定するとともに、Bouin液で固定し、メタクリレート樹脂による組織切片標本を作製し、動物極に位置する卵門付近の細胞質に局在する第2減数分裂中期の紡錘体の形態を観察した。マサバでは、排卵直後から急激に受精率、孵化率は減少し、排卵後18時間で受精率0となったが、MPF活性は排卵直後の高い活性を維持しており、また、アポトーシスも起こっていなかった。ゼブラフィッシュも同様の傾向を示した。これらのことは、マサバ、ゼビラフィッシュともに、排卵卵は時間が経過しても第2減数分裂中期にあることを示している。さらに、ゼブラフィッシュで紡錘体の形態を調べた結果、排卵後7.5時間の過熟卵では、紡錘体の軸方向の変化や紡錘糸の消失が90%を超える卵で起こっていた。すなわちゼブラフィッシュの排卵後過熟卵では仮に精子が進入できても、その後の卵細胞核における染色体の分配や極体の放出が正常に進行しないことを示唆しており、これが受精率低下の一因と考えられた。

在鸡蛋质量下降中，该研究集中于“卵巢过度灌输”，其中卵巢腔内排卵的卵（排卵卵）的施肥速率随着停留时间而迅速减少，旨在阐明细胞学因素。今年，我们使用鲭鱼调查了卵形后的超剥离，MPF活性和纺锤形态，它们易于复制为耕种的目标物种，斑马鱼作为模型动物。施用HCG后33小时（500 IU/kg），并收集排卵的卵在排卵后0、3、6、12、18、24、30和36小时收集排卵，并进行了人工调整以检查受精率和孵化率。通过使用[γ-^<32> p] ATP将磷酸组掺入组蛋白H1中，测量MPF活性。另一方面，使用排卵鸡蛋在排卵后0和7.5小时使用排卵鸡蛋测量斑马鱼，并用bouin液固定在甲基丙烯酸酯树脂中制备组织截面样品，并观察到第二次质量质量的动物形象，并观察到固定型的动物形态，并观察到旋转型的形态。在鲭鱼中，排卵后的受精速率和孵化率突然立即降低，在排卵后18小时，受精率达到0，但在排卵后立即保持了高活性，并且没有发生凋亡。斑马鱼显示出类似的趋势。这些结果表明，鲭鱼和沸石都有排卵卵，即使在时间过后，也处于第二减数分裂阶段。此外，当我们研究斑马鱼的纺锤体的形态时，排卵后7.5小时的过度成熟鸡蛋时，超过90％的卵中的主轴和纺锤线的消失发生了轴向变化。换句话说，即使精子进入斑马鱼的过度成熟卵，它也表明染色体的分布和卵细胞核中极性体的释放也无法正常进展，这被认为是减少受精率的因素。