新規合成キスぺプチンを用いた有用魚類の成熟制御に関する研究

新合成Kisspeptin控制有用鱼成熟的研究

• 批准号: 13F03910
• 负责人: 松山 倫也
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13F03910/
• 关键词: 春機発動; 初回成熟; マサバ; Kiss; 高活性アゴニスト; 養殖魚; キスペプチン; BPG-axis; 成熟促進; 神経ペプチド

我々はこれまでに，全生活史にわたる飼育実験系を整備しているマサバを用いて，マサバは2種のKiss分子（Kiss1およびKiss2）をもつこと，15アミノ酸残基よりなるKiss1-15および12アミノ酸残基よりなるKiss2-12のin vivo投与実験の結果，特に雄魚においてKiss1-15が顕著な成熟促進効果をもつことを明らかにした。しかし，アミノ酸配列情報よりマサバのKiss2はKiss2-12が産生されるが，Kiss1はKiss1-16が産生されることが予想された。本研究では，（1）マサバ脳内で産生され機能するKiss1およびKiss2それぞれの分子サイズを同定し，それらの受容体との結合特性を解析するとともに，（2）特にin vitro投与で成熟促進効果の顕著なKiss1を対象として，一部アミノ酸組成を置換し，native Kiss1より生物活性の高い合成Kiss1を開発する。（1）マサバ脳内におけるKiss分子種の同定：4種合成Kiss（Kiss1-16, Kiss1-15, pKiss1-15およびKiss2-12）の混合試料を逆相クロマトグラフィーで分離し，各ペプチドの溶出時間を求めスタンダードとしたは雌雄成魚およそ100尾の視床下部を氷冷4N AcOH中でホモジナイズした。モジュレートを超遠心し，上清はMW5000の限外ろ過膜をかけて除タンパクを行った。次に，スタンダードと同じ条件でマサバ脳抽出液をHPLCにより分離し，各ペプチドのフラクションを回収した。回収後のフラクションは凍結乾燥を行い保存している。今後は，更に精密な分離が可能なカラムを用いた2段目のHPLC分析を行い，回収した試料のnanoLC/IT-TOF-MSによるMS/MS分析を行い，ペプチドの同定を行う。（2）高活性アゴニストの開発：マサバ脳内におけるKiss分子種の同定が終了したのち，生体投与実験で成熟誘導に効果のあったKiss1を対象として，各アミノ酸残基を1個ずつアラニンに置換して生理活性を検討するアラニンスキャンを行い，活性発現に必須なアミノ酸を検討する予定である。活性はレポーターアッセイで測定する。

In the whole life cycle, the whole life cycle is divided into two parts: Kiss molecules (Kiss1 Kiss2), acid residues (Kiss1-15), acid residues (Kiss2-12), acid residues (in vivo-12). Special attention has been paid to the promotion of maturity by Kiss1-15. I don't know what to say. I don't know. Kiss2, Kiss2-12, Kiss1-16, Kiss1-16. The main results of this study are as follows: (1) in this study, (1) the molecular structure of Kiss1 is the same as that of Kiss2, and the receptor is analyzed by combining the characteristics of the receptor. (2) the results of special in vitro and ripening promotion are similar to that of Kiss1, and the synthesis of Kiss1 is based on the bioactivity of native Kiss1. (1) four kinds of synthetic Kiss (Kiss1-16, Kiss1-15, pKiss1-15, Kiss2-12) mixtures were separated in reverse phase, and the dissolution time of each compound was determined. The molecular weight of each compound was determined as follows: the mixture of four kinds of synthetic Kiss2-16, Kiss1-15 and pKiss1-15 was separated in reverse phase. The supernatant is sensitive to the MW5000 limit, and the supernatant is not allowed to pass the membrane. For the second time, the extraction fluid was separated from the HPLC under the same conditions, and each sample was separated. After you go back to your home, you can make sure that you don't know how to dry it, and then save it. In the future, more precise separation may be necessary to use the 2-segment HPLC analysis line, and then return to the nanoLC/IT-TOF-MS analysis line, which is the same as the MS/MS analysis line. (2) High activity enzyme Kiss molecular assay was used to determine the molecular weight of the enzyme, and the bioassay was used to induce the growth of Kiss1 in vivo and in vivo. The acid residue of each enzyme was used to determine the physiological activity of the enzyme, the physiological activity of the enzyme, the biological activity of the enzyme, and the activity must be determined. The activity of the instrument is very high.

项目成果

Functional analysis of kisspeptin peptides in adult immature chub mackerel (Scomber japonicus) using an intracerebroventricular administration method

• DOI: 10.1016/j.neulet.2013.12.072
• 发表时间: 2014-02
• 期刊: Neuroscience Letters
• 影响因子: 2.5
• 作者: H. Ohga;S. Selvaraj;Hayato Adachi;Yui Imanaga;Mitsuo Nyuji;A. Yamaguchi;M. Matsuyama

Effects of synthetic kisspeptin peptides and GnRH analogue on oocyte growth and circulating sex steroids in prepubertal female chub mackerel (Scomber japonicus)

• DOI: 10.1111/are.12342
• 发表时间: 2015-08
• 期刊: Aquaculture Research
• 影响因子: 2
• 作者: S. Selvaraj;H. Ohga;Mitsuo Nyuji;Hajime Kitano;N. Nagano;A. Yamaguchi;M. Matsuyama

mRNA levels of kisspeptins, kisspeptin receptors, and GnRH1 in the brain of chub mackerel during puberty

青春期鲭鱼大脑中 Kisspeptin、Kisspeptin 受体和 GnRH1 的 mRNA 水平

• DOI: 10.1016/j.cbpa.2014.09.012
• 发表时间: 2015
• 期刊: Comparative Biochemistry and Physiology
• 作者: Ohga H;Adachi H;Matsumori K;Kodama R;Nyuji M;Selvaraj S;Kato K;Yamamoto S;Yamaguchi A;Matsuyama M
• 通讯作者: Matsuyama M

Pituitary gonadotropin releasing hormone receptor in the chub mackerel (Scomber japonicus): Identification, ligand-sensitivity and gene expression during pubertal process

鲭鱼（鲭鱼）垂体促性腺激素释放激素受体：青春期过程中的鉴定、配体敏感性和基因表达

• 发表时间: 2014
• 作者: Lumayno SDP;Ohga H;Selvaraj S;Yamaguchi A;Matsuyama M.
• 通讯作者: Matsuyama M.

Identification, ligand-sensitivity and gene expression of pituitary specific GnRH receptor in the chub mackerel (Scomber japonicas)

鲭鱼 (Scomber japonicas) 垂体特异性 GnRH 受体的鉴定、配体敏感性和基因表达

• 发表时间: 2014
• 作者: Tohru Ishitani;Nobuyuki Shimizu;Megumi Sakuma;Shizuka Ishitani.;Sanny DP Lumayno，大賀浩史，Sethu Selvaraj，山口明彦，松山倫也
• 通讯作者: Sanny DP Lumayno，大賀浩史，Sethu Selvaraj，山口明彦，松山倫也