ホルモン誘導性局所因子による卵巣機能調節に関する研究

激素局部因素调节卵巢功能的研究

• 批准号: 01J00008
• 负责人: 土屋 惠 (2001, 2003)
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes (2003)Gunma University (2001-2002)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J00008/
• 关键词: Ad4BP; SF-1; 二次元電気泳動; 質量分析法; Y-1細胞; 翻訳後修飾; 卵巣顆粒膜細胞; NGFI-A; StAR; ゴナドトロピンレセプター

生殖活動は視床下部-脳下垂体-性腺から構築される内分泌系によって支配されているが、特に生殖腺や副腎皮質において特異的に産生されるステロイドホルモンはその中心となる重要な役割を担っている。卵巣における性ホルモンの作用機序にはゴナドトロピンレセプターおよびそれに関わる様々な局所因子が重要な役割をもつが、それらにより制御されているステロイドホルモンの産生に不可欠な遺伝子群の発現、およびその転写を調節する因子の分子機構を理解することは、卵巣のフィードバック機能を考える上で非常に重要である。近年ヒトの疾患およびその組織学的な解析から、核内受容体型転写因子Ad4BP/SF-1がステロイド産生酵素の発現におけるキーファクターとして働くことが明らかになってきた。しかしこれら遺伝学、組織学的な解析に比べ、この因子の分子制御機構は不明な点が多い。私はAd4BP/SF-1タンパク質の制御を解き明かすためにこのタンパク質の翻訳後修飾に着目し検討を行った。はじめにマウス副腎由来のY-1細胞から全細胞抽出液または核抽出液を調整し、二次元電気泳動法により展開し、Ad4BP/SF-1の分離を行った。その結果、Ad4BP/SF-1は少なくとも4つのスポットに分離され、さらにこのスポットが熱や脱リン酸化阻害剤によって変化を受けることを見出した。次に、免疫沈降法を用いて細胞抽出液よりAd4BP/SF-1を精製し、SDS-PAGEによって分離した後、数種類のプロテアーゼを用いてゲル内消化を行い、Ad4BP/SF-1のペプチド断片を調整した。調整したペプチド断片は質量分析法によって解析し、それぞれの断片の質量の差をもとに修飾部位と修飾の種類の同定を行った。その結果、Ad4BP/SF-1分子内に新規のリン酸化部位を同定した。現在、作製した同部位の点変異を培養細胞へ導入し、Ad4BP/SF-1の修飾による機能調節の解析およびその修飾を制御する上流因子についての検討を行っている。これらの結果は、卵巣での性ホルモンの作用機構を理解する上で重要な知見となると考えている。

Reproductive activity is controlled by the endocrine system in the lower part of the optic bed-pituitary-gonadal structure, especially in the gonads and adrenal cortex. The mechanism of action of the protein is very important for understanding the molecular mechanism of the factors that regulate the generation and development of the protein, and for examining the function of the protein. In recent years, the histological analysis of the disease, nuclear receptor type writing factor Ad4BP/SF-1 and the production of enzymes in the field of medicine have been carried out. There are many unknown points in the molecular control mechanism of genetic and histological analysis. Ad4BP/SF-1 is a new type of high quality control system. Y-1 cells from the origin of accessory kidney were isolated from whole cell extract and nuclear extract by two-dimensional electrophoresis. As a result, Ad4 BP/SF-1 has been shown to be resistant to heat and acidification. In addition, the immunoprecipitation method was used to purify the extract of Ad4BP/SF-1, SDS-PAGE was used to separate and adjust the fragments of Ad4BP/SF-1. To adjust the quality of the fragment analysis method, the difference between the quality of the fragment and the quality of the modified part is determined. As a result, the new intramolecular structure of Ad4BP/SF-1 was determined. Now, we have conducted a study on the modification of Ad4BP/SF-1, the analysis of its functional regulation and the control of its up-stream factors. The results of this study are important for understanding the nature and mechanism of action.

项目成果

Tsuchiya M.et al.: "Expression of steroidogenic acute regulatory protein (StAR) and LH receptor in MA-1O cells"Life Science. 73. 2855-2863 (2003)

Tsuchiya M.等人：“MA-1O 细胞中类固醇生成急性调节蛋白 (StAR) 和 LH 受体的表达”生命科学。

Kikuchi N.et al.: "Clinical Factors in Successful Transfer of Cryopreserved Thawed Embryos"THE KITAKANTO MEDICAL JOURNAL. 52. 117-121 (2002)

Kikuchi N.等人：“冷冻保存解冻胚胎成功移植的临床因素”北关东医学杂志。

Inoue K.et al.: "Effect of transforming growth factof Bata on the expression of luteinizing hormone receptor in cultured rat granulosa cells"Biol Reprod. 67. 610-615 (2002)

Inoue K.等人：“Bata 转化生长因子对培养的大鼠颗粒细胞中黄体生成素受体表达的影响”Biol Reprod。

Yoshino M.et al.: "Early growth response gene-1 regulates the expression of the rat luteinizing hormone receptor gene"Biol Reprod. 66. 1813-1819 (2002)

Yoshino M.等人：“早期生长反应基因-1 调节大鼠黄体生成素受体基因的表达”Biol Reprod。

Minegishi T.et al.: "Molecular Cloning, Cellular Distribution and Regulation of Rat Ssteroidogenic Acute Regulatory Protein (StAR) in the Ovary"J. Reprod.. 48. 1-15 (2002)

Minegishi T.et al.：“大鼠卵巢中类固醇生成急性调节蛋白（StAR）的分子克隆、细胞分布和调节”J。