SF-1を介した変異KCNJ5抑制による原発性アルドステロン症の治療開発

通过 SF-1 抑制突变型 KCNJ5 开发治疗原发性醛固酮增多症的方法

• 批准号: 20K17526
• 负责人: 錦戸 彩加
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17526/
• 关键词: KCNJ5; 原発性アルドステロン症; 副腎

本邦における原発性アルドステロン症の主病態であるアルドステロン産生副腎皮質腺腫(APA)における腫瘍発症機構解明の一因として、私達はカリウムチャネルの一つであるKCNJ5遺伝子の副腎皮質細胞における体細胞変異に着目して研究を進めてきた。前年度までに、KCNJ5遺伝子のサブクローニングを行い、副腎皮質特異的転写因子Steroidogenic factor-1（SF-1）が、KCNJ5遺伝子プロモーター上のSF-1応答領を介して遺伝子発現制御していることや、KCNJ5遺伝子発現が副腎皮質球状層にほぼ限局していることを見出し、副腎癌細胞由来のH295R細胞株を用いて抗SF-1抗体によるChIP(クロマチン免疫沈降)アッセイを施行し、KCNJ5遺伝子プロモーター領域のSF-1応答配列へのSF-1のrecruitmentを確認してきた。令和４年度は、私達が既に作製・樹立しておいた変異KCNJ5恒常的発現H295R細胞株と、対照群としての野生型KCNJ5恒常的発現H295R細胞株から、それぞれRNAを抽出し、Qualityチェックの後、cDNAマイクロアレイ解析を施行した。解析結果を元にパスウェイ解析やGO解析を行い、変異KCNJ5遺伝子によって発現量が大きく変動する遺伝子群を網羅的に解析した。また変異KCNJ5恒常的発現H295R細胞株と野生型KCNJ5恒常的発現H295R細胞株の継代培養を継続し、経時的な形態変化を確認した。また、私等が既に樹立し、保有している変異KCNJ5ノックインマウスの継代と観察を行なった。生後６月齢までの観察では、野生型マウスと比較しても変異KCNJ5ノックインマウスの副腎には肉眼的には腫瘍性変化を認めなかった。

State に お け る original 発 sex ア ル ド ス テ ロ ン disease の main pathological で あ る ア ル ド ス テ ロ ン produce adrenal adenoma (APA) swollen に お け る swollen sores 発 disease agencies interpret の due と し て, private は カ リ ウ ム チ ャ ネ ル の a つ で あ る KCNJ5 posthumous son 伝 の adrenal cortex cells に お け る somatic - different に with mesh し を て research into め て き た. In the previous year, までに, the 伝 offspring of KCNJ5, サブ, サブ, ロ, ニ, グを, グを were found to have 転, adrenal cord-specific 転 writing factors Steroidogenic Factor 1 (SF - 1) が, KCNJ5 but 伝 プ ロ モ ー タ ー 応 の SF - 1 on a collar を interface し て posthumous son 伝 発 now suppression し て い る こ と や, KCNJ5 but 伝 発 now が adrenal cortex layer spherical に ほ ぼ limit bureau し て い る こ と を see し, adrenal gland cancer cell origin の H295R cell line を with い て に SF - 1 antibodies よ る ChIP (ク ロ マ チ ン immune sink) ア ッ セ イ を し enforcement, KCNJ5 but 伝 プ ロ モ ー タ ー field の 応 SF - 1 a match column へ の の SF - 1 recruitment を confirm し て き た. Make and 4 year は, private が に both as a system, sets up the し て お い た - different KCNJ5 constant 発 H295R cell lines と now, according to the group of seaborne と し て の wild-type KCNJ5 constant 発 now H295R cell line か ら, そ れ ぞ を れ RNA extraction し, Quality チ ェ ッ ク の, cDNA マ イ ク ロ ア レ イ parsing を imposed し た. Analytical results を yuan に パ ス ウ ェ イ parsing や analytical を い, GO - traces of different KCNJ5 伝 son に よ っ て 発 quantities now が き く - move す る but 伝 subgroup を snare に parsing し た. Youdaoplaceholder0 mutant KCNJ5 constant presence of H295R cell line と wild-type KCNJ5 constant presence of H295R cell line <s:1> 継 subculture を継続 た, over time な morphological changes を confirm た た. ま た, private が both に し, retain し て い る - different KCNJ5 ノ ッ ク イ ン マ ウ ス の 継 generation と 観 examine を line な っ た. Born after June 齢 ま で の 観 examine で は, wild type マ ウ ス と compare し て も - different KCNJ5 ノ ッ ク イ ン マ ウ ス の adrenal に は eye に は swollen sores sex - the を recognize め な か っ た.

项目成果

KCNJ5遺伝子プロモーター活性はSteroidogenic factor-1(SF-1)に依存する

KCNJ5 基因启动子活性取决于类固醇生成因子 1 (SF-1)

• 发表时间: 2021
• 作者: 錦戸 彩加;岡村 孝志;中島 康代;吉岡 誠之;土岐 明子;石田 恵美;堀口 和彦;吉野 聡;松本 俊一;小澤 厚志;山田 正信
• 通讯作者: 山田 正信

Steroidogenic factor-1 (SF-1)によるKCNJ5遺伝子の副腎特異的発現制御機構の解明

阐明类固醇生成因子 1 (SF-1) 对 KCNJ5 基因的肾上腺特异性表达调节机制

• 发表时间: 2020
• 作者: 錦戸彩加;岡村孝志;中島康代;吉岡誠之;土岐明子;石田恵美;堀口和彦;吉野聡;松本俊一;小澤厚志;山田正信
• 通讯作者: 山田正信