权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

破骨細胞の分化機構の解析とその制御

破骨细胞分化机制分析及其调控

基本信息

批准号：
01J00397
负责人：
宮本健史
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Keio University (2002-2003)Kumamoto University (2001)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J00397/
关键词：
破骨細胞マクロファージ樹状細胞サブトラクション

项目摘要

マクロファージとのDNAサブトラクション法により得られた破骨細胞に特異的に発現する分子の中から、特に破骨細胞に特異的もしくは破骨細胞分化に伴い発現が強く誘導される分子として5つの分子を同定した。これらの分子については全て全長cDNAのクローニングならびにエクソン/イントロン構造を決定し、またノザンブロット及びRT-PCRにて組織と血液細胞系列における発現を検討したところ、血液細胞系列においては破骨細胞に特異的であっても組織レベルでは骨以外の組織に発現を認めるものがあった。各分子の発現を破骨細胞分化のタイムコースを追ってみてみると、分化に伴い徐々に発現が強くなるものと、分化中期にピークがあり後期になるとむしろ発現が弱くなるものを認めた。それぞれの分子のC末端にGFPとのキメラ蛋白を作製し細胞内における局在を調べたところ、4分子は細胞質にまた1分子は核内に局在していた。これらの分子の機能評価をレトロウイルスによる過剰発現系で検討したところ、分化へは特に影響しないことが分かった。クローニングした分子はGeneBankに登録するとともに、以上の結果については現在進めているsiRNAを用いた抑制実験の結果と合わせて投稿準備中である。また、新規7回膜貫通型受容体に関してはノックアウトマウスを作製し、ホモ接合体の骨密度がリッターメイトに比べて約10%低下することを見出した。また発現制御機構についても解析をい、破骨細胞分化に重要とされるc-FosおよびNFATc1がこの分子の発現誘導に関与することを見出した。実際c-fosノックアウトマウス由来の脾細胞に破骨細胞分化誘導をかけても発現が誘導されず、レトロウイルスにてc-fosの発現をレスキューすると発現が回復することが観察された。これらの結果についても現在投稿準備中である。

The DNA sequence of osteoclast-specific molecules was identified by DNA sequencing. The DNA sequence of osteoclast-specific molecules was identified by DNA sequencing. The full length cDNA sequence was determined by PCR and RT-PCR, and the development of tissue and blood cell series was studied by PCR and RT-PCR. The development of each molecule in osteoclast differentiation is characterized by strong differentiation, weak differentiation and weak differentiation. The C-terminal part of the molecule is called GFP. The function of these molecules is evaluated in detail. The results of the above are now in progress. The results of the suppression of siRNA are in preparation. The bone density of the joint is about 10% lower than that of the joint. It was found that c-Fos and NFATc1 are important for osteoclast differentiation and are involved in the induction of these molecules. The differentiation of osteoclasts from spleen cells derived from c-fos was induced, and the development of c-fos was observed. The results are now in preparation.