癌転移における細胞外マトリックスタンパク質の機能-ラミニン5の機能解析

细胞外基质蛋白在癌症转移中的功能——层粘连蛋白5的功能分析

• 批准号: 01J04087
• 负责人: 廣崎 智巳
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J04087/
• 关键词: ラミニン6; ラミニン5; 細胞接着; 細胞運動; 限定分解; インテグリン; プロテオグリカン

ラミニン6(LN6)の精製とその生物活性LN6 (α3β1γ1)はラミニン5(LN5;α3β3γ2)と同様に、皮膚の基底膜を構成するマトリックスタンパク質として知られるが、その機能に関する報告例はほとんどない。私はラミニンα3鎖の強制発現系を樹立し、これを用いてLN6とその変異体タンパク質の単離を行った。その結果、LN5とLN6に共通の性質として高い細胞接着活性を持つこと、その活性発現にα3鎖G3ドメインが必須であることを見出した。一方、LN5が強い細胞運動促進活性を示すのに対し、LN6の運動活性が低いことがわかった。これはLN5の運動促進活性の発現における他のサブユニット(β3、γ2鎖)の寄与を強く示唆する。次にヘパリン結合ドメインとして知られるα3鎖G4-5ドメインの機能解析を行った。既に、このドメインが限定分解によりほとんどのLN5分子から遊離されることを見出し、報告している。ところがLN6ではこのような限定分解がわずかにしか起きないことがわかった。さらに遊離状態のG4-5ドメインがヘパリン依存的な細胞接着活性を示すことがわかった。この活性発現に関与するG4-5ドメイン受容体としてヘパラン硫酸プロテオグリカンの一種を同定した。しかし、LN6分子内のG4-5ドメインはインテグリン依存的な細胞接着に対しむしろ抑制的に機能した。その原因として、このドメインがインテグリン結合部位に対する立体的な障害となる可能性を示唆するデータを得た。以上の内容は、国際学会(Gordon Research Conference)においても発表した。

The purification of LN6 (LN6) and its biological activity LN6 (α3β1γ1) and LN5 (LN5;α3β3γ2) are similar to each other, and the composition of the basement membrane of the skin is related to the quality and function of the skin. The stress response system of the α3 lock is established, and the stress response system of the LN6 lock is used. As a result, the common properties of LN5 and LN6 are shown in the following paragraphs: In one case, LN5 showed strong movement-promoting activity, while LN6 showed low movement-promoting activity. The expression of LN5 activity is related to the expression of β3 and γ2. Next, the function analysis of the α3 lock G4-5 is carried out. In addition, the LN5 molecule can be dissociated from the target molecule.ところがLN6ではこのような限定分解がわずかにしか起きないことがわかった。In addition, the free state of G4-5 cells can be used to demonstrate cell-dependent adhesion activity. This activity is related to the G4-5 receptor, and is also related to the G4-5 receptor. G4-5 in LN-6 molecule is dependent on cell function and then inhibits cell function. The reason for this is that it is possible to indicate the three-dimensional damage caused by the combination of factors. The above content is presented at the Gordon Research Conference.

项目成果

Kariya, Y., Hirosaki, T., Miyazaki, K.et al.: "Differential regulation of cellular adhesion and migration by laminin-5 variants with structural changes in the G3 domain of α3 chain."Journal of Cellular Biochemistry. 88/3. 506-520 (2003)

Kariya, Y.、Hirosaki, T.、Miyazaki, K.等人：“层粘连蛋白 5 变体对 α3 链 G3 结构域的结构变化对细胞粘附和迁移的差异调节。”细胞生物化学杂志 88/。 3.506-520 (2003)

廣崎智巳, 宮崎香: "細胞外マトリックスタンパク質と癌の悪性増殖-ラミニン5を例として"実験医学. 20/14. 2156-2161 (2002)

Tomomi Hirosaki、Kaoru Miyazaki：“细胞外基质蛋白和癌症的恶性生长 - 以层粘连蛋白 5 为例”实验医学 20/14。

Hirosaki, T., Miyazaki, K.et al.: "Laminin-6 is activated by proteolytic processing and regulates cellular adhesion and migration differently from laminin-5."Journal of Biological Chemistry. 277/51. 49287-49295 (2002)

Hirosaki, T.、Miyazaki, K.等人：“Laminin-6 通过蛋白水解过程被激活，并以与 Laminin-5 不同的方式调节细胞粘附和迁移。”生物化学杂志。

Kariya, Y., Hirosaki, T., Miyazaki, K.et al.: "Efficient expression system of human recombinant laminin-5."Journal of Biology (Tokyo). 132/4. 607-612 (2002)

Kariya, Y.、Hirosaki, T.、Miyazaki, K.等人：“人重组层粘连蛋白 5 的高效表达系统”。生物学杂志（东京）。