Biosynthese, Sortierung und Protein-Protein-Interaktionen von SNARE-Proteinen in vivo: Untersuchungen mit GFP-Fusionsproteinen in transfizierten Neuronen

体内 SNARE 蛋白的生物合成、分选和蛋白间相互作用：转染神经元中 GFP 融合蛋白的研究

• 批准号: 5308860
• 负责人: Privatdozent Dr. Michael Veit
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Chemie und Biochemie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2000-12-31 至 2003-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5308860?language=en
• 关键词: Biosynthese; Sortierung; und; Protein; Interaktionen

Als Schlüsselproteine der Neurosekretion wurden die SNARE-Proteine Synaptobrevin, Syntaxin und SNAP-25 identifiziert. Sie bilden den ternären SNARE-Komplex aus, welcher eine Voraussetzung für die Fusion von synaptischen Vesikeln mit der presynaptischen Membran darstellt. Weitere Proteine, wie Synaptotagmin, nSec1 und Synaptophysin, binden an einzelne SNARE-Proteine und können dadurch die Bildung des SNARE-Komplexes und/oder den intrazellulären Transport der SNARE-Proteine regulieren. Der Biosyntheseweg dieser Proteine, ihre Lokalisation vor und nach Nervenstimulation und insbesondere in welchen intrazellulären Kompartimenten die unterschiedlichen Protein-Protein Interaktionen stattfinden, ist nicht bekannt. Dies soll durch die Expression von GFP-Fusionsproteinen in Neuronen und durch verschiedene Fluoreszenztechniken wie Immunfluoreszenz, konfokale Lasermikroskopie und FRAP (Fluorescence resovery after photobleaching) untersucht werden. Um die Interaktion von zwei Proteinen nachzuweisen, werden diese mit unterschiedlichen Varianten des GFP versehen und mit Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer (FRET) analysiert. Im Vordergrund der Untersuchungen steht die Bildung des binären und ternären SNARE-Komplexes und dessen Regulation durch die Bindung von nSec1 an Syntaxin. Die Bildung dieser Proteinkomplexe ist entscheidend für die Regulation der Neurosekretion und damit für die Kommunikation zwischen Nervenzellen.

利用神经分离的Schlüsselproteine对SNARE蛋白Synaptobrevin、Syntaxin和SNAP-25进行鉴定。Sie bilden den den ternären SNARE-Komplex aus，welcher eine Voraussetzung für die Fusion von synaptischen Vesikeln mit der presynaptischen Membran darstellt. Weitere Proteine，如Synaptotagmin、nSec 1和Synaptophysin，与一种SNARE蛋白结合，并可促进SNARE复合物的形成和/或SNARE蛋白的细胞内转运。Der Biosyntheseweg dieser Proteine，ihre Lokalisation vor und nach Nervenstimulation and insbesondere in welchen intrazellulären Kompartimenten die unterschiedlichen Protein-Protein Interaktionen stattfinden，ist nicht bekannt.通过免疫荧光、激光共聚焦和FRAP（光漂白后的荧光分辨率）等方法检测GFP融合蛋白在神经元中的表达。韦尔登利用荧光蛋白的不规则变异体和共振能量转移（FRET）分析技术，研究了两种蛋白质的相互作用。通过对nSec 1和Syntaxin的结合，研究了双、三个SNARE复合体的形成和调节。Die Bildung dieser Proteinkomplex ist entscheidend für die Regulation der Neurosekretion und damit für die Kombikation zwischen Nervenzellen.