Equines Arteritis Virus (EAV): Identifizierung und Funktion der am Zelleintritt von EAV beteiligten viralen und zellulären Membranproteine

马动脉炎病毒 (EAV)：参与 EAV 细胞进入的病毒和细胞膜蛋白的鉴定和功能

• 批准号: 5444654
• 负责人: Privatdozent Dr. Michael Veit
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Virologie (WE05)
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2003-12-31 至 2011-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5444654?language=en
• 关键词: Equines; Arteritis; Virus; EAV; Identifizierung

Infektionen von Pferden mit dem equinen Arteritisvirus (EAV) führen jährlich zu hohen wirtschaftlichen Verlusten. Die Proteine von EAV sind molekular gut charakterisiert, aber ihre Funktion während des viralen Replikationszyklus sowie der Rezeptor der Targetzelle sind unbekannt. In diesem Projekt sollen mit biochemischen und biophysikalischen Methoden die viralen und zellulären Membranproteine, die am Eindringen von EAV in die Zelle beteiligt sind, identifiziert und ihre Funktion charakterisiert werden. EAV besitzt sechs Membranproteine, die in drei Proteinkomplexen (Gp5/M, Gp2b/Gp3/Gp4, E-Protein) in der Virushülle vorkommen. Die Membranproteine sollen aus Viruspartikeln extrahiert, gereinigt und in Liposomen eingebaut werden. Um die membranfusionierende Aktivitäten von EAV zu rekonstituieren, werden die Virosomen mit fluoreszenzmarkierten Liposomen bzw. mit Erythrozyten inkubiert. Eine Membranfusion kann dann durch Fluoreszenzmessungen bzw. Hämolyse nachgewiesen werden. Zur Analyse der rezeptorbindenden Aktivität werden die Membranproteine vorher mit Fluoreszenzfarbstoffen markiert und mit Zellen inkubiert, die mit Virus infizierbar sind. Eine Bindung an die Zelloberfläche kann dann mittels FACS-Analyse untersucht werden. Auf der Grundlage der Identifizierung des an das Target bindenden viralen Proteins soll der zelluläre Rezeptor für EAV ermittelt werden. Damit ist dann der Weg eröffnet auf molekularer Ebene die Rezeptorbindung und Membranfusion von EAV zu charakterisieren, die ein wichtiger Angriffspunkt antiviraler Medikamente oder auch neutralisierender Antikörper darstellt.

Pferden感染马关节炎病毒（EAV）可导致严重的关节炎。EAV的蛋白质具有良好的分子特性，但其功能与靶向受体的病毒介导作用不同。本课题采用生物化学和生物物理学方法对EAV的病毒和细胞膜蛋白进行了研究，并对EAV的病毒和细胞膜蛋白进行了鉴定和功能特性韦尔登。EAV由膜蛋白组成，在病毒前体中以三种蛋白复合体（Gp 5/M，Gp 2b/Gp 3/Gp 4，E-Protein）形式存在。由病毒颗粒产生的可溶性膜蛋白可在韦尔登中形成。EAV的膜融合活性可调节，韦尔登可通过荧光标记脂质体bzw使病毒体活化。用赤藓糖醇制成。一个膜可以通过过滤器过滤。我们要去韦尔登。用酶标记和酶联免疫吸附试验分析了膜蛋白的结合活性，发现韦尔登与病毒感染有关。一个与Zelloberfläche的绑定可以通过FACS分析进行韦尔登。通过对EAV病毒受体韦尔登的靶向结合病毒蛋白的初步鉴定。在EAV上的Rezeptorbindung和Membranfusion的分子结合和膜特性的Weg eröffnet中，有一种抗病毒药物或中和剂。