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早老症:ウェルナー症候群原因遺伝子産物の機能の分子レベルでの解析

早衰症：在分子水平上分析引起维尔纳综合征的基因产物的功能

基本信息

批准号：
01J07982
负责人：
川辺洋一
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J07982/
关键词：
ウェルナー症候群 WHIP AAA^+ATPase family Two-hybrid Screening DT40 DNA二本鎖切断修復 Ku70 XRCC3

项目摘要

1 WHIPと相互作用するタンパク質の同定WHIP相互作用タンパク質を同定することを目的にTwo-hybridスクリーニングを行い、WHIP自身での結合を明らかにした。また、ゲル濾過カラムでの解析でWHIPは六量体を形成することを明らかにした。申請者はWRNとWHIPの結合にはATP結合モチーフが重要であることを既に示しているが、このWHIPの六量体形成にはATP結合モチーフの関与がないことを明らかにした。2 ニワトリDT40細胞を用いたWRNとWHIPの遺伝学的解析WHIP/WRN二重破壊株を作成し、細胞増殖能と4NQOへの感受性を測定したところ、WRN単独破壊株で見られた細胞増殖能の低下と4NQOへの高感受性が部分的に回復することを見出した。これによりWRNの関わる経路においてWHIPがWRNの上流で機能することが明らかになった。3 ニワトリDT40細胞を用いたWRNとDNA二本鎖切断修復因子との遺伝学的解析WRNと二本鎖DNA修復経路に関わるタンパク質群(Ku70,XRCC3,DNA-PKcs, Lig4)との遺伝子二重破壊株の樹立を行い、現在までにすべての遺伝子破壊株の樹立を終了した。現在までにKU70/WRNとXRCC3/WRN二重破壊株について細胞増殖能、細胞傷害剤(MMS, Cisplatin,4NQO)への感受性を測定した。細胞増殖能についてはそれぞれの単独破壊株より両二重破壊株とも増殖能の低下が見られた。薬剤感受性については、WRN単独破壊株ではすべての薬剤に対して感受性を示すが、KU70/WRN二重破壊株においてはKU70単独破壊株と同様にすべての薬剤に対してWTより抵抗性を示した。一方、XRCC3/WRN二重破壊株ではすべての薬剤に対して感受性は相加的であった。

1. The WHIP interaction is the same as that of the WHIP interaction. The purpose of the interaction is the same as that of the WHIP interaction. The purpose of the interaction is to determine the accuracy of the interaction, and the combination of the WHIP and WHIP. Through the analysis of the six-body mass of the WHIP, we can tell the difference between the two parts. The applicant uses the WRN WHIP to combine the ATP with the key information to show that both the ATP and the whipset hexahedron form a combination of the ATP and the information. (2) the double broken plant of WHIP/WRN was made by analyzing the double broken plant of WHIP/WRN by the analysis of WRN's WHIP susceptibility, the cell colonization of WHIP/WRN was determined by 4NQO susceptibility test, and the cell colonization of WRN was determined by low 4NQO and high susceptibility. This is the best way to improve the quality of the WHIP and WRN. The machine will be able to tell you what to do. (3) the analysis of the study of cutting off the factor of repair by using the ordinary university of WRN DNA; the analysis of WRN by the ordinary university DNA repair road; the group (Ku70,XRCC3,DNA-PKcs, Lig4) has broken the tree by the double break of the plant, and now the tree has been broken. At present, the double breakage of KU70/WRN XRCC3/WRN shows that the cell fertility, cell damage (MMS, Cisplatin,4NQO) and susceptibility test. The colonization ability of the plant was lower than that of the control plant. The susceptibility was detected by WRN, the susceptibility was detected by WT, the susceptibility was detected by double breakage, and the resistance was detected by WT. On the one hand, XRCC3/WRN doubly broke the sum of the susceptibility of the plant.