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核内レセプターの転写活性制御におけるユビキチン化修飾の機能の解析

泛素化修饰调节核受体转录活性的功能分析

基本信息

批准号：
16790043
负责人：
川辺洋一
金额：
$ 2.18万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790043/
关键词：
Nuclear receptor Estrogen receptor alpha Ubiquitin proteasome Ubiquitin ligase Mi-2 NuRD complex transcriptional co-repressor CHIP Quality control

项目摘要

我々はこれまでに核内レセプターの一つで転写活性化機構が最も良く研究されているエストロゲンレセプター(ERα)について、ユビキチン化酵素の単離を行い、新規ユビキチンリガーゼのNRDF(Nuclear receptor degradation regurating factor)を同定した。今年度の解析でこのNRDFはERαの分解を促進するものの、発現パターンは全身発現を示し、さらに昨年度に作成したNRDF機能欠損(KO)マウスの解析からNRDF KOマウスは細胞周期遅延による胎盤形成と胎児成長抑制により出生後9.5日で胎生致死となることを明らかにした。この表現系はERαとの関連が不明であるため、ERαとは異なる因子、すなわち細胞周期関連因子をユビキチン化の標的タンパク質としていることが示唆された。そこで、申請者はERαとは異なるNRDFの標的タンパク質を得るためにNRDFタンパク質安定発現株を作製し、核抽出液からNRDF複合体の精製、MALDI-TOF Massで同定し、ユビキチン化の候補タンパク質として転写コリプレッサーのMi-2/NuRD複合体を得た。現在までに、これらのタンパク質複合体の中でHDAC2がユビキチン化修飾されることまで見出している。このMi-2/NuRD複合体はクロマチンリモデリング因子のMi-2やヒストンデアセチラーゼのHDAC1/2、メチル基結合タンパク質のMBD2、3を含む転写抑制因子複合体で、転写活性化因子、さらにはメチル化ヒストンやDNA上のCpGメチル化サイトに結合することが報告され、特異的遺伝子の発現抑制だけでなくGlobalなクロマチンの不活性化に寄与すると考えられている。しかしながら、機能の多様性から現在までにその機能の全体像や制御メカニズムついては不明な点が多い。今後NRDFによるMi-2/NuRD複合体の分解機構の解析を行い、転写コリプレッサーのユビキチン化による制御メカニズムの解明を目指す。さらに、NRDF KOマウスの解析と連動させることで、Mi-2/NuRD複合体の分解の個体発生や分化におけるエピジェネティクス制御のメカニズムを明らかにする。

In response to this, we have developed a new approach to the study of nuclear receptor degradation regulating factor (NRDF), a new approach to the study of Nuclear receptor degradation regulating factor (ERα). This year's analysis of NRDF alpha decomposition promotion, discovery, and systemic development, today's analysis of NRDF KO, and cell cycle delay, placenta formation, and fetal growth inhibition, 9.5 days after birth. The expression of ERα is unknown, ERα is different, and the expression of ER α is different. For example, the applicant has obtained the quality of the NRDF, the preparation of the NRDF complex, the purification of the nuclear extract, the identification of the MALDI-TOF Mass, and the preparation of the Mi-2/NuRD complex Now, in the middle of the protein complex, HDAC2 is transformed into a protein complex. The Mi-2/NuRD complex contains Mi-2, CpG, and HDAC1/2, CpG, and N-terminal binding factors. MBD2 and MBD3 of the Mi-2/NuRD complex contain N-terminal binding factors, CpG, and N-terminal binding factors. The occurrence of specific genes is inhibited by Global inactivation. All the functions are controlled by the system. In the future, the analysis of the decomposition mechanism of Mi-2/NuRD complex in NRDF will be carried out, and the control mechanism of NRDF will be explained. In addition, the analysis and linkage of NRDF KO complex and Mi-2/NuRD complex are discussed.