ヒト中胚葉分化過程における遺伝子カスケードの抽出

人中胚层分化过程中基因级联的提取

• 批准号: 01J60059
• 负责人: 足立 仁
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (2003)Kyushu University (2002)Osaka University (2001)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J60059/
• 关键词: 間葉系幹細胞; 脂肪分化; 遺伝子発現; iAFLP; 遺伝子発現プロファイル

ヒト間葉系幹細胞(以下、hMSC)(Bio*Whittaker社製)は、骨髄から単離された多分化能を有する非造血幹細胞であり、脂肪細胞、骨芽細胞、軟骨細胞、心筋細胞、腱細胞等の間葉系細胞に分化できる。近年、in vitroにおける脂肪細胞、骨芽細胞、軟骨細胞への分化・誘導方法が確立され再生医療等への応用が期待されている。本実験の最終目標は、iAFLP法によるhMSCの分化・誘導過程における時系列的な遺伝子発現プロファイルを構築することである。その第一歩として、hMSCの脂肪細胞分化過程における遺伝子発現変化に着目した。脂肪細胞は、体温維持を司る褐色脂肪細胞とエネルギーを貯蔵する白色脂肪細胞に大別される。本実験では、白色脂肪細胞分化に焦点をあてることにより、肥満、II型糖尿病の研究に将来役立てるための遺伝子発現プロファイルの抽出を試みた。細胞のロットにより、1回だけの分化・誘導による分化率に差があった。脂肪細胞への分化率がhMSCのロットに依存すること、1回の分化・誘導ステップで30%以上の分化能を示すロットが存在することが報告されていた。(私信;Bio*Whittaker社)。従って、本実験には1F2155を使用することに決定した。同時に、total RNAの泳動より、RNAはインタクトなものであった。しかし、RNA収量を比較すると、1F1061の方が30%減となっていることから分化・誘導をかける際の細胞数が若干少なかったと推測できた。同様のタイムコースで実験を行っているために、これは細胞増殖にも差があったためと考えられた。脂肪細胞の発生はヒトと齧歯類では重要な点でいくつか異なっていた。最近、マイクロアレイを使った遺伝子発現プロファイルのデータにおいても、分化後期では3T3-L1細胞と同様な挙動を示すが、分化初期では異なったプロファイルをとっていた。そもそも、hMSCは脂肪細胞への分化初期とコミットに関連する研究に非常に理想的な細胞であり、本実験を開始する意義は十分にあると断定できた。

Mesenchymal stem cells (hereinafter, hMSC)(manufactured by Bio * Whittaker) are capable of differentiation into non-hematopoietic stem cells such as adipocytes, osteoblasts, chondrocytes, cardiac muscle cells, and tendon cells. In recent years, methods for differentiation and induction of adipocytes, osteoblasts and chondrocytes have been established in vitro, and applications such as regenerative medicine are expected. The ultimate goal of this study is to construct a time-series of cDNA fragments for the differentiation and induction of hMSCs by iAFLP. The first step in the development of adipocytes is the development of adipocytes in hMSCs. Fat cells are responsible for maintaining body temperature. Brown fat cells are responsible for the development and storage of white fat cells. This study focuses on the development of white adipose cells in the future. The differentiation rate of the cells was different from that of the control cells. The differentiation rate of adipocytes depends on the differentiation rate of hMSCs. The differentiation rate of adipocytes depends on the differentiation rate of hMSCs. The differentiation rate of adipocytes depends on the differentiation rate of hMSCs. The differentiation rate of adipocytes depends on the differentiation rate of hMSCs. (Private letter; Bio * Whittaker Society). This is the first time I've ever seen a woman. At the same time, total RNA migration, RNA migration, total RNA migration The number of cells at the time of differentiation and induction was estimated to be 30% less than that of 1F 1061. In the same way, we can see the difference between the two. The development of adipocytes is an important factor in the development of adipocytes. Recently, 3T3-L1 cells have been shown to be homogeneous in the late differentiation stage and heterogeneous in the early differentiation stage. The study of the relationship between the initial stage of adipocyte differentiation and the initial stage of adipocyte differentiation is very important.