腫瘍免疫におけるTollを介したシグナル伝達の機能

Toll 介导的信号传导在肿瘤免疫中的作用

• 批准号: 01J60063
• 负责人: 渡辺 康行
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J60063/
• 关键词: Toll-like receptor; リン酸化; シグナル; Toll Like Receptor

微生物由来のDNAには、哺乳類には見られない非メチル化CpGモチーフが存在し、これにより抗腫瘍効果が発揮されることが知られている。非メチル化CpGをはじめとする微生物構成成分はToll-like receptor (TLR)ファミリーにより認識される。非メチル化DNAに対する反応性がTLRのアダプター分子MyD88の欠損マウスでは欠失していることから、MyD88がTLRのシグナル伝達を担う分子の一つと考えられる。MyD88と相互作用するTIRAP分子は細胞内でリン酸化を受けていることがわかった。このリン酸化はTLRのシグナル依存的に生じることが分かり、さらにTIRAPのリン酸化はMyD88の欠損マウスでは観察されなかったため、MyD88がTIRAPのリン酸化に不可欠であると考えられた。TIRAPを含むコンプレックスを免疫沈降で精製し、in vitroでリン酸化反応を行わせたところ、セリンとトレオニン残基がリン酸化されていることが分かった。TIRAPのN末とC末の二つに分け解析を進めると、リン酸化フォームと思われるバンドが観察されるのはC末領域だけであった。さらに、C末領域では全長と同じ細胞内局在を示すのに対し、N末領域は細胞質全体に存在し、その局在性を失っていた。TLRシグナルのリードアウトであるNF-KBの活性化もC末領域では残っていて、N末領域では失われていた。そこで、C末領域にあるセリン、トレオニンをそれぞれアラニンに置換した変異体を作成した。その結果、168番目のセリン残基一つをアラニンに置換したものだけがNF-KBの活性が顕著に低下していた。さらに、リン酸化反応実験で、この変異体はリン酸化されないことが分かった。GFPとの融合タンパク質を発現させると、この変異体は局在性を失い、細胞質全体に存在した。以上のことから、TLRシグナルでTIRAPは168番目のセリンがリン酸化されることで、その局在と、NF-KBの活性化を制御していることが示唆された。

DNA from microorganisms, mammals, and other organisms is not the same as CpG. Non-CpG is the constituent of microorganisms and Toll-like receptor (TLR) is recognized. The anti-TLR and anti-TLR molecules MyD88 are missing, MyD88 is TLR and anti-TLR molecules are missing. MyD88 interacts with TIRAP molecules to induce intracellular acidification. This link acidification is a result of the dependence of TLR on the structure. Today, TIRAP link acidification is a result of the loss of MyD88. MyD88 is an indispensable link in TIRAP link acidification. TIRAP contains the amino acid residues in the amino acid sequence, which are purified by immunoprecipitation and in vitro. TIRAP's N end and C end are divided into two parts, namely, the first part and the second part. In addition, the C terminal domain has the same intracellular structure, and the N terminal domain has the same cytoplasmic structure, and the C terminal domain has the same cytoplasmic structure. The activation of NF-KB in the C terminal domain and in the N terminal domain is incomplete. The first is to create a new domain. As a result, the activity of NF-KB was decreased due to the substitution of 168 amino acid residues. This is the first time that we've seen this. GFP fusion protein is present in the cytoplasm, and the cytoplasm is present in the cytoplasm The above mentioned TLR and TIRAP are the key to the activation of NF-KB.

项目成果

Shintaro Sato: "Toll/IL-1 receptor domain-containing adaptor inducing IFN-beta (TRIF) associates with TNF receptor-associated factor 6 and TANK-binding kinase-1, and activates two distinct transcription factors, NF-kappa B and IFN-regulatory factor-3, in

Shintaro Sato：“含有 Toll/IL-1 受体结构域的接头诱导 IFN-β (TRIF) 与 TNF 受体相关因子 6 和 TANK 结合激酶 1 结合，并激活两种不同的转录因子：NF-kappa B 和 IFN

Hirotaka Kuwata.: "IL-10-inducible Bcl-3 negatively regulates LPS-induced TNF-alpha production in macrophages."Blood. 102巻12号. 4123-4129 (2003)

Hirotaka Kuwata.：“IL-10 诱导的 Bcl-3 负向调节巨噬细胞中 LPS 诱导的 TNF-α 产生。”第 102 卷，第 12 期。4123-4129 (2003)