メダカ転移因子Tol-2による変異遺伝子タギング

青鳉转座元件 Tol-2 的突变基因标记

• 批准号: 01J60094
• 负责人: 浜田 進
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The University of Tokyo (2002)National Institute of Genetics (2001)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J60094/
• 关键词: メダカ; 転移因子; Tol-2; 相同組み換え; 染色体の再構成

メダカから単離されたDNA型転移因子Tol-2の転移の際に生じるDNAの切断が、相同組み換えを引き起こすかどうかを調べる系を構築した。Tol-2転移因子の両側に相同なくりかえし配列が存在する場合、Tol-2の切り出しによるDNA切断がそれらのくりかえし配列間の相同組み換えを誘発することが期待される。そこで、Tol-2の両側にLacZ遺伝子のN末端側約3分の2とC末端側約3分の2(互いに約600bpの部分が相同である)を配置した組み換えDNAを作成し、メダカ鰭繊維芽細胞由来の培養細胞OLHN1およびOL32に形質導入した。この組み換えDNA構造からTol-2が切り出されたあとLacZ遺伝子の部分で相同組み換えが起きると、全長のLacZ遺伝子が生成し、その細胞はβ-galactosidase活性を示す。得られた形質転換細胞にTol-2の転移に必要なtransposase遺伝子を導入したものとしなかったものについてβ-galactosidase活性を指標にして相同組み換えの頻度を調べたが双方共に全く組み換えが検出されなかった。

In this case, the Tol-2-type transfer factor, DNA-based transfer factor, DNA transfer factor and DNA transfer factor. The Tol-2 shift factor is the same as that in the same configuration, and the Tol-2 switch is closed, and the Tol-2 is cut out. The DNA is cut out, and the configuration is configured in the same group. The N-terminal region of the LacZ gene is about 3 minutes, and the C-terminal is about 3 minutes. (the 600bp is partly the same as each other). The configuration causes the DNA to be made, and the germ cells are derived from the cell OLHN1. The OL32 is inserted into the cell. In the same part of the system, the full-length DNA gene was generated, and the activity of β-galactosidase was detected in the same part of the system. The whole DNA was used to detect the activity of β-galactosidase in the same tissue. It is necessary to change the size of the Tol-2 to the required transposase. The activity of β-galactosidase is the same as that of the same group. Both parties are responsible for the whole system.