緑内障遺伝子ミオシリンの結合生体分子の解明とその分子間相互作用の解析

青光眼基因肌纤蛋白结合生物分子的阐明及其分子间相互作用的分析

• 批准号: 12671723
• 负责人: 中村 裕
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12671723/
• 关键词: ミオシリン; チュブリン; マウス; プロモーター; 多型

これまでに全長のヒトミオシリン蛋白の精製を種々試みたが、発現ベクターをいくつか変えても、おそらくミオシリンの細胞毒性のためか、十分な発現量が得られず、純度の高い蛋白が十分得られなかった。そこで、N-末とC-末の2つに分割したヒトおよびマウスミオシリン蛋白の精製を行い、95%以上の純度で大量に精製できたので、今後これを用いて研究を進める予定である。ミオシリンにプロモーター領域には種々の因子があり、何らかの生体分子が関与している可能性がある。我々は、緑内障患者50人と正常50人のミオシリンのプロモーター、-83G、-126G、-153T、-190G、および-224Cの5カ所に関して、変異の有無をスクリーニングした。その結果、-224Cにおいてのみ正常人と緑内障患者で差がみられた。今後は、大多数の規模でこれらの5つの変異をすく理ニングするとともに、-224Cにおける変異がミオシリンの発現に影響を及ぼすか否かを検討する。視神経乳頭部の主な細胞成分であるアストロサイトにおけるミオシリンの発現を免疫染色、免疫電顕にて観察した。同時にチュブリンも染色したが、ミオシリンと同じ部位が染色されていた。両者の関連が示唆され、今後は、精製されたチュブリンを用いて、BEACON2000蛍光偏光度測定システムを用いてミオシリンとの分子間相互作用の解析を行う。

The purification of the full-length protein was tested, and the discovery of the protein was carried out. The cytotoxicity of the protein was tested, and the detection amount was very high. The purity of the protein was very high. N-terminal and C-terminal are divided into two parts. The purification of protein is carried out in a large amount with purity of more than 95%. The future research on the use of protein is scheduled. The relationship between biological molecules and the possibility of biological transformation is discussed. 50 cataract patients and 50 normal patients were selected from the group consisting of-83G,-126G,-153T,-190G,-224C, and 5 different groups. The results,-224C, are different for normal people and cataract patients. In the future, most of the scale of the change in the management of the change in the development of the impact of the change in the-224C and whether to discuss The main cellular components of the optic papilla were observed by immunostaining and immunoelectrophotography. At the same time, the color of the skin is different from that of the skin. Analysis of molecular interactions in BEACON2000 spectrophotometer