课题基金 / 基金详情

ランダムポリペプチドによる蛋白質の構造形成能の創出

ランダムポリペプチドによる蛋白質の構造形成能の創出
使用随机多肽创建蛋白质结构形成能力
批准号：
13208016
负责人：
四方 哲也
金额：
$3.39万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2001 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13208016/
关键词：
タンパク質ランダムアミノ酸配列進化人工酵素

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项目成果

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計画されていた3つの選択方法を検討した結果、プレートに遷移状態アナログ(CAII)を固定する選択が有効であることがわかった。そこで、試験的にランダムアミノ酸配列(140アミノ酸残基)をもったディスプレーファージを調整し、CAIIに対する親和性による選択で進化実験を行った。ランダムアミノ酸配列から初めて、各世代の集団を10クローンとした。第一世代では、調べた10クローンの中に強い親和性を示すものはなかった。しかし、その中でも親和性が一番高い配列を選び、ランダム変異を加え、第二世代のクローン集団とした。そして、この選択と変異のサイクルを6世代目まで繰り返した。その結果、世代が進むにつれて、徐々にCAIIにたいする親和性が上昇し、天然抗体の約半分程度に親和性をもったランダムポリペプチドが六世代目で得られた。このことは、今年度の目的として上げた選択系の確立が達成されたことを示している。さらに、進化してきたランダムポリペプチドをファージから切り離し、エステル加水分解活性を測定した。その結果、世代が進むにつれてエステル加水分解活性が上昇していることがわかった。さらに、このエステラーゼ活性はCAIIによって阻害がかかることがわかった。これは、得られたポリペプチド上でおこるエステルの加水分解反応の遷移状態が、選択に用いたCAIIと構造が似ているためで、ランダムな初期配列からスタートしたポリペプチドに活性中心が進化してきていることを示唆している。
期刊论文(3)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Kashiwagi, A.: "Plasticity of fitness and diversification process during an experimental molecular evolution"J. Mol. Evol.. 52. 502-509 (2001)
Kashiwagi, A.：“实验分子进化过程中适应性的可塑性和多样化过程”J.
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Matsuura, T.: "Importance of compartment formation for a self-encoding system"PNAS, USA.. (in press).
Matsuura, T.：“自编码系统的区室形成的重要性”PNAS，美国..（正在出版）。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Tokuriki, N.: "Effects of amino acid substitution on the physicochemical properties of artificial proteins with random sequences"J. Biosci. Bioeng.. 92(2). 167-172 (2001)
Tokuriki, N.：“氨基酸取代对随机序列人工蛋白质理化性质的影响”J.
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
2種類の実験室内共生系のゲノム解析
  • 批准号：
    16013223
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $3.58万
  • 财政年份：
    2004
  • 负责人：
    四方 哲也
  • 依托单位：
    Osaka University
リポソーム内タンパク質合成による自立的膜融合
  • 批准号：
    15657035
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 资助金额：
    $2.11万
  • 财政年份：
    2003
  • 负责人：
    四方 哲也
  • 依托单位：
    Osaka University
2種類の実験室内共生系のゲノム解析
  • 批准号：
    15013235
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $1.92万
  • 财政年份：
    2003
  • 负责人：
    四方 哲也
  • 依托单位：
    Osaka University
細胞内ATPレベルを指標とした大腸菌連続培養の細胞集団挙動解析
  • 批准号：
    03F00656
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 资助金额：
    $0.77万
  • 财政年份：
    2003
  • 负责人：
    四方 哲也
  • 依托单位：
    Osaka University