インフルエンザウイルス遺伝子の転写鋳型DNA断片化によるワクチン生産への応用

流感病毒基因转录模板DNA片段化在疫苗生产中的应用

• 批准号: 13226025
• 负责人: 五藤 秀男
• 金额: --
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226025/
• 关键词: インフルエンザウイルス; ワクチン; PCR; リバース・ジェネティクス

新型インフルエンザウイルスの出現は過去の世界的大流行の原因でもあり、インフルエンザにおいてもっとも重要な問題である。インフルエンザの流行に対しワクチンによる予防は有効な手段であるが、現在の生産システムは新型インフルエンザウイルスの出現に迅速に対応できる態勢ではない。本研究では、リバース・ジェネティクス法を応用し、新型インフルエンザウイルスの出現に迅速に対応できるシステムを構築するための技術基盤を確立する。ワクチン生産に必要なウイルスの遺伝子情報のみを取り出し、かつ任意にリバース・ジェネティクス法でウイルスとして回収するために転写鋳型DNA断片を作製した。レポータ遺伝子を持つインフルエンザウイルスゲノム様cDNAの両末端にRNAポリメラーゼIのプロモータとターミネータを付加したDNA断片をPCRで合成した。このDNA断片をインフルエンザウイルスのポリメラーゼ蛋白質発現プラスミドと同時に細胞に導入したところレポータ遺伝子の発現が確認できた。さらに、それぞれのディレーション変異体を作製してプロモータとターミネータの最小機能領域を同定した結果、プロモータ領域が約150塩基、ターミネータ領域が約50塩基の構造が効率よく機能的にRNAを合成できることが明らかとなった。この結果をもとに、A/WSN/33株のウイルス遺伝子cDNA末端にそれらの領域を付加したDNA断片を作製し、細胞に導入したところウイルスの合成が確認できた。これらの結果より、インフルエンザウイルスのRNA遺伝子をRNA転写ができるDNA断片に変換し、任意にウイルスとして回収可能であることが示された。

The cause of pandemics in the world has been discovered in recent years, and important problems have been found. It is very popular to know that there is a good chance that there is a good way to prevent it, and that there is a new type of food in the market. The purpose of this study is to improve the application of the method, and the new method is effective in the development of the technology base. It is necessary to make sure that it is necessary to make a copy of the DNA fragment of the writing type. The DNA fragment PCR synthesizer was added to the DNA fragment PCR synthesis. Please check the DNA fragment to make sure that you do not know what to do. At the same time, you need to enter the cell to make sure that you are not. The results show that the minimum mechanical field is the same as the results of the experiment, and that the RNA synthesis of the minimum mechanical field is the same as the result of the test. The results showed that the cDNA end of the A/WSN/33 plant was divided into two parts, and the end of the DNA fragment was added to the field, and the cells were inserted into the cell to confirm the synthesis. The results show that the RNA fragments may be displayed in the RNA, and any DNA fragments may be returned.

项目成果

Ito T, et al.: "Generation of a highly pathogenic avian influenza A virus from an avirulent field isolate by passaging in chickens"J Virol.. 75・9. 4439-4443 (2001)

Ito T 等人：“从无毒力的野外分离物中通过鸡传播产生高致病性禽流感 A 病毒”J Virol.. 75・9（2001 年）。

Goto H, et al.: "Plasminogen-binding activity of neuraminidase determines the pathogenicity of influenza A virus"J Virol. 75・19. 9297-9301 (2001)

Goto H等：“神经氨酸酶的纤溶酶原结合活性决定甲型流感病毒的致病性”J Virol 75・19（2001）。