単純ヘルペスウイルスの病原性発現におけるアクセサリー遺伝子の役割

辅助基因在单纯疱疹病毒致病性表达中的作用

• 批准号: 13226037
• 负责人: 西山 幸廣
• 金额: --
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226037/
• 关键词: 単純ヘルペスウィルス; 病原性; ul56遺伝子; 膜蛋白質; アクセサリー遺伝子

単純ヘルペスウイルス(HSV)は少なくとも74種の遺伝子をコードするが、その半数以上は培養細胞での増殖には必須ではないアクセサリー遺伝子であることが明らかにされている。本研究はHSVの病原性発現におけるアクセサリー遺伝子の役割、作用機構を明らかにしようとするものである。マウスに対する病原性発現におけるUL56の重要性についてはBeckerのグループによる一連の研究があるが、その役割や機能については全く分かっていないといって良い。我々もUL56欠損ウイルスの病原性については、その特性を確認したが、特異抗体、真核発現系などを用いた解析から、この蛋白質が小胞輸送に関わることを示唆する結果を得た。UL56遺伝子は、塩基配列より235個のアミノ酸からなる蛋白質をコードしていることが予想された。大腸菌における発現系を作製し、精製したGST-UL56融合蛋白質を用いて特異抗体を作製した。この抗体はHSV2型感染細胞の35,34,33,32,31及び30kDa蛋白質と特異的に反応した。Vero細胞でのUL56単独発現では31、30kDaの蛋白質のみを検出した。HSV2型では1型と異なり、開始コドンの10アミノ酸上流部位にATGが存在する。上流部を含む発現系を作製し検討したところ、34,32,31,30 kDa、の4本のバンドが検出された。以上の結果は、上流のATGからも翻訳が開始されていることを示唆するものである。また、蛍光抗体法による観察では感染6時間後より検出され、ゴルジ体のマーカーGolgi58KProteinと共局在した。より感染の後期ではUL56蛋白質は核周囲の部に集積すると同時に、細胞質にも顆粒状に検出された。単独発現では、ゴルジ体への集積像とともに細胞質に顆粒状に分布し、後者はearly endosomeのマーカーEEA1と共局在した。さらに、界面活性剤に対する挙動、sucrose gradient fractionationによる解析の結果から、UL56蛋白質はlipid raftsと会合していることが示唆された。

The number of pure HSV strains is 74, and more than half of all HSV strains must be cultured in order to grow. This study aims to clarify the mechanism of HSV pathogenicity development and its mechanism. The importance of UL56 in the development of pathogenicity is discussed in detail below. The results of identification of pathogenicity, characterization, specific antibody, eukaryotic development system, analysis of protein and cellular transport of U56 were obtained. UL56 contains 235 amino acid residues and protein residues. E. coli development system was prepared, refined and GST-UL56 fusion protein was prepared with specific antibody. These antibodies target HSV type 2 infected cells with proteins of 35, 34, 33, 32, 31 and 30kDa. UL56 proteins of 31 and 30kDa were found in Vero cells alone. HSV type 2 is different from type 1, and ATG exists in the upstream part of the acid at the beginning of the 10-day period. The upper part of the system contains four components: 34, 32, 31, 30 kDa. The above results show that the ATG has changed its position. 6 hours after infection, the virus was detected and the Golgi58 protein was detected. In the late stages of infection, UL56 protein accumulates in the nucleus, and in the cytoplasm in granular form. In addition, the early endosome of the EEA1 cells were isolated from the cytoplasm. The results of the analysis of the interaction and sucrose gradient fractionation showed that the UL56 protein had no interaction with lipid rafts.

项目成果

Yamauchi, Y., et al.: "The UL14 protein of herpes simplex virus type2 translocates the minor capsid protein and the DNA chearage and packaging UL33 protein into the nucleus of coexpressing cells"Journal of General Virology. 82. 321-330 (2001)

Yamauchi, Y. 等人：“2 型单纯疱疹病毒的 UL14 蛋白易位次要衣壳蛋白和 DNA 剪切并将 UL33 蛋白包装到共表达细胞的细胞核中”普通病毒学杂志。

Inagaki-Ohara, K., et al.: "Effect of deletion of US2 and US3 from herpes simplex virus type2 on immune responses in the murine ragina following intravaginal infection"Vaccine. 20. 98-104 (2001)

Inagaki-Ohara, K. 等人：“从 2 型单纯疱疹病毒中删除 US2 和 US3 对阴道内感染后小鼠阴道免疫反应的影响”疫苗。

Nishiyama, Y., et al.: "Antiapoptotic protein kinase of herpes simplex virus"Trends in Microbiology. (in press). (2002)

Nishiyama, Y. 等人：“单纯疱疹病毒的抗凋亡蛋白激酶”微生物学趋势。

Nozawa, N., et al.: "Identification and characterization of the UL7 gene product of herpes simplex virus type2"Virus Genes. (in press). (2002)

Nozawa, N. 等人：“2 型单纯疱疹病毒 UL7 基因产物的鉴定和表征”病毒基因。

Zhu, H.Y., et al.: "Identification and characterization of the UL24 gene product of herpes simplex virus type2"Virus Gnenes. 22. 321-327 (2001)

Zhu, H.Y. 等人：“单纯疱疹病毒 2 型 UL24 基因产物的鉴定和表征”Virus Gnenes。