新しい分泌型マラリア防御抗原タンパクの機能と遺伝子構造の解析

新型分泌型疟疾保护性抗原蛋白的功能和遗传结构分析

• 批准号: 13226111
• 负责人: 小林 富美恵
• 金额: --
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226111/
• 关键词: マラリア; 感染防御抗原; ワクチン; Plasmodium berghei

1.Plasmodium berghei XAT感染に対して強い防御効果を示すモノクローナル抗体B1D6抗体とH6G11抗体(いずれもIgG1)を、原虫感染赤血球を接種して感染耐過後、感染赤血球を再接種したBALB/cマウスの脾細胞を用いて作成した。これらのうち、B1D6抗体が認識する標的抗原の推定分子量をwestern blot法によって検討すると、この抗体は還元条件下で電気泳動によって分離されたタンパクのうち推定分子量150kDと160kDの成分に反応した。B1D6抗体を結合させたHiTrap NHS-activatedカラムおよびホルミルセルロファインカラムにより標的抗原をアフィニティー精製し、50mgの粗抗原から約300ugの精製抗原を得た。Western-blot法により、この精製抗原標品中に上記の150kDと160kDタンパクが含まれることを確認した。精製標品を電気泳動したSDS-PAGEゲルによりを用いて150kDと160kDタンパクを分離後、それぞれの内部アミノ酸配列の解析が進行中である。2.P.berghei XATの感染防御抗原であるB1D6抗原が感染のどの時期に出現するかを明らかにするためにB1D6抗体を用いたtwo-sited assay systemを構築した。H6G11抗体の標的抗原がB1D6抗体の標的抗原と同一であることが明らかとなったので、より感度の高いアッセイ系を確立するために各々の抗体を精製・標識し、1抗体法と2抗体法を比較検討した。その結果、2抗体法により血中のマラリア抗原を検出し得た。3.P.berghei XATの感染防御抗原は、蛍光抗体法および免疫電子顕微鏡法の結果からMSP-1などの膜結合型抗原とは異なるタイプの可溶性抗原と考えられた。今後、さらにその遺伝的性状について解析を進めるとともに、この抗原が如何にして原虫排除・殺滅に関わるのかを探る予定である。

1. Plasmodium berghei XAT infection is a strong defense against infection. Antibodies B1D6 and H6G11 (including IgG1) are used to inoculate protozoan infected erythrocytes. After infection, infected erythrocytes are re-inoculated with BALB/c. The estimated molecular weight of the target antigen was determined by western blot. The estimated molecular weight of the target antigen was determined by electrokinetic method. B1D6 antibody binds to HiTrap NHS-activated antigen, purified from 50mg of crude antigen to about 300ug of purified antigen. Western-blot method is used to identify the 150kD and 160kD antigens in the purified antigen standard. After the separation of the purified standard by SDS-PAGE at 150kD and 160kD, the analysis of the internal acid alignment is in progress. 2. Construction of a two-site assay system for P. berghei XAT infection defense antigen and B1D6 antibody The target antigen of H6G11 antibody is the same as that of B1D6 antibody, and the sensitivity of each antibody is determined by purification, identification, and comparison of antibody methods. The results showed that 2 antibody methods were used to detect the antigen in the blood. 3. P. berghei XAT infection defense antigen, light antibody method and immunoelectron microscopy results of MSP-1 membrane bound antigen and different soluble antigen In the future, the characteristics of the virus will be analyzed, and the antigen will be eliminated and killed.

项目成果

Haruki K: "Evaluation of AnaeroPack(AnP) type as tools of Plasmodium falciparum cultivation and drug sensitivity tests"Jpn J Trop Med Hyg. 29・4. 365-370 (2001)

Haruki K：“AnaeroPack（AnP）型作为恶性疟原虫培养和药物敏感性测试工具的评估”Jpn J Trop Med Hyg 29・4（2001）。

小林 富美恵: "マラリア感染における宿主の免疫応答と感染防御機構・・赤内型原虫感染におけるT細胞とサイトカイン"動物の原虫病. 16・2. 60-67 (2001)

小林富江：“疟疾感染中的宿主免疫反应和感染防御机制……赤虫感染中的T细胞和细胞因子”动物原生动物疾病16・2。

Kobayashi F: "In vitro antibody response to the tetrapeptide repeats of Plasmodium falciparum circumsporozoite protein by splenocytes from mice infected with P. yoelii yoelii"J Vet Med Sci. 63 (7). 743-749 (2001)

Kobayashi F：“感染约氏疟原虫的小鼠脾细胞对恶性疟原虫环子孢子蛋白四肽重复序列的体外抗体反应”J Vet Med Sci。