視細胞株を用いた視細胞変性に対する薬剤の検討

使用感光细胞系检查治疗感光细胞变性的药物

• 批准号: 13771009
• 负责人: 富田 浩史
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771009/
• 关键词: 網膜神経細胞; カスパーゼ; アポトーシス; 視細胞; 神経栄養因子

昨年度までに、温度感受性SV40 large T抗原遺伝子導入ラット網膜から単離された視細胞株(clone : tsSV40 p-2)を用いて、視細胞死に対して保護作用を有する因子を検討してきた。in vivo動物実験モデルにおいて現在までに視細胞変性に対して保護効果を有することが報告されている栄養因子(BDNF, CNTF)の保護作用について調べた結果、BDNF, CNTFの培地中への添加によって、血清除去によって誘導される細胞死が顕著に抑制された。また、アデノウイルスベクターを用いてCNTF, BDNF遺伝子をtsSV40 p-2に導入したところ、細胞死が、導入しない群に比較して遅延することが明らかとなってきた。本年度は現在市販されている薬剤の中から網膜神経細胞死に対して保護作用を有する薬剤を見出すため、薬剤のスクリーニングを行った。ベタキソロールは緑内障治療薬として使用されている薬剤である。摘出網膜を用いた研究で、低酸素負荷に対する細胞障害に対して、ベタキソロールは保護作用を有することが明らかとなった。また、ベタキソロールの保護のメカニズムは電位依存性カルシウムチャネルブロッカーとして作用することによるとすでに報告されていたが、この研究で細胞外からのカルシウム流入を抑制するだけではなく、細胞カルシウム濃度を別の機構でコントロールしている可能性が示された。また、ベタキソロールと同様緑内障点眼薬であるニプラジロールの保護効果についても検討した。ニプラジロールは一酸化窒素遊離作用を有することが知られている。軸索切断による網膜神経節細胞死に対して保護作用を持つこと、培養細胞を用いた研究でそのメカニズムはcGMP依存性のカスパーゼ活性抑制とカスパーゼのニトロソ化による直接的な酵素活性抑制が介在していることが明らかとなった。

直到去年，已经使用感光细胞系（克隆：TSSV40 P-2）研究了对感光细胞死亡具有保护作用的因素，从温度敏感的SV40大型T抗原转基因大鼠视网膜分离出来。我们研究了营养因子（BDNF，CNTF）的保护作用，据报道，在体内动物实验模型中，它具有针对感光受体变性的保护作用，并且将BDNF和CNTF添加到培养基中，可显着抑制通过血清清除引起的细胞死亡。此外，当使用腺病毒载体将CNTF和BDNF基因引入TSSV40 P-2中时，已经揭示了与非转导组相比，细胞死亡延迟了。今年，我们筛选了这些药物，以发现目前可用药物中对视网膜神经元死亡具有保护作用的药物。 Betaxolol是一种用于治疗青光眼的药物。使用切除的视网膜的研究表明，贝物莫尔对细胞对缺氧的损害具有保护作用。此外，尽管已经报道了保护贝物酚的机制充当电压依赖性的钙通道阻滞剂，但这项研究表明，它不仅可以抑制细胞外钙涌入，还可以通过不同的机制来控制细胞钙浓度。我们还研究了尼普拉迪洛尔的保护作用，尼普拉迪醇是一种类似于贝物莫尔的青光眼眼滴。已知Nipradilol具有一氧化氮释放作用。使用培养细胞的研究表明，由于轴突切开术引起的视网膜神经节细胞死亡具有保护作用，并且该机制是由CGMP依赖性抑制capase活性介导的，并直接通过caspase的硝化作用直接抑制酶活性。

项目成果

Abe T, Tomita H, Kano T, et al.: "Autologous iris pigment epithelial cell transplantation in monkey subretinal region"Curr Eye Res. 20. 268-275 (2000)

Abe T、Tomita H、Kano T 等人：“猴视网膜下区域的自体虹膜色素上皮细胞移植”Curr Eye Res。

Nakazawa, T, Tomita, H, Yamaguchi, K et al.: "Neuroprotective effect of nipradilol on axotomized rat retinal ganglion cells"Curr Eye Res. 24. 114-122 (2002)

Nakazawa, T, Tomita, H, Yamaguchi, K 等人：“尼普地洛对轴突大鼠视网膜神经节细胞的神经保护作用”Curr Eye Res。

Yamaguchi K, Tomita H, Sugano E, et al.: "MAP Kinase Inhibitor, PD98059, Inhibits Rat RPE Cell Replication by Cell Cycle Arrest"Jpn J Ophthalmol. (in press). (2002)

Yamaguchi K、Tomita H、Sugano E 等人：“MAP 激酶抑制剂，PD98059，通过细胞周期停滞抑制大鼠 RPE 细胞复制”Jpn J Ophamol。

Tomita, H, Nakazawa, T, Sugano, E et al.: "Niprdilol inhibits apoptosis by preventing the activation of caspase-3 via S-nitrosylation and the cGMP-dependent pathway"Eur J Pharmacol. 452. 263-270 (2002)

Tomita, H, Nakazawa, T, Sugano, E 等人：“尼普地洛通过 S-亚硝基化和 cGMP 依赖性途径阻止 caspase-3 的激活，从而抑制细胞凋亡”Eur J Pharmacol。

Sakuragi M, Tomita H, Abe T, Tamai M: "Changes of phagocytic capacity in basic fibroblast growth factor-transfected iris pigment epithelial cells in rats"Curr Eye Res. 23. 185-191 (2001)

Sakuragi M、Tomita H、Abe T、Tamai M：“碱性成纤维细胞生长因子转染的大鼠虹膜色素上皮细胞吞噬能力的变化”Curr Eye Res。