NK細胞におけるCD2分子を介したシグナル伝達機構の解析(新たな歯周病治療法開発のための基礎的検討)

NK细胞中CD2分子介导的信号转导机制分析（牙周病治疗新方法开发的基础研究）

• 批准号: 13771121
• 负责人: 井上 博
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Osaka Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771121/
• 关键词: NK細胞; CD2; シグナル伝達; LAT; raft

NK細胞のCD2分子を介した活性化シグナルの伝達経路について検討をおこなった.1)CD2架橋刺激による細胞内アダプタータンパクLAT(linker for activation of T cells)のチロシンリン酸化状態の検討:NK様細胞株(NK3.3)をpolystylene beadsに固相化した抗体(Control, CD2,LFA-1,CD28,FcγRなど)により架橋刺激を加えた.抗リン酸化チロシン抗体を用いたWestern blotting法により、LATのチロシンリン酸化状態を検出した.その結果CD2架橋刺激にて、細胞内アダプタータンパクLATのチロシンリン酸化の増強がみられた.CD2架橋刺激におけるLATのチロシンリン酸化の増強はCD2の濃度依存性に認められた.またCD2架橋刺激後30秒でLATのチロシンリン酸化が認められ,以後5分で最強となる事が確認された.2)LAT結合細胞内シグナル伝達物質の同定:1)で得られた可溶化タンパク質を抗LAT抗体にて免疫沈降を行いLATに結合した細胞内シグナル伝達物質の同定を行った.その結果、LATとp85との結合は、CD2架橋刺激依存性でありPl3-kinaseのN末端SH2とC末端SH2の両者で認められた.また、LATとPLC-γ1との結合はCD2架橋刺激依存性でありPLC-γ1のN末端SH2とC末端SH2の両者で認められた.今回の結果により、CD2架橋刺激によりNK細胞が活性化されアダプタータンパクのLATがチロシンリン酸化される.LATはp85やPLC-γ1と結合して活性化シグナルを伝達していくことが明らかとなった.

NK cells の CD2 molecular を interface し た activeness シ グ ナ ル の 伝 da 経 road に つ い て beg を 検 お こ な っ た. 1) CD2 bridging stimulus に よ る intracellular ア ダ プ タ ー タ ン パ ク LAT (would for the activation of T Cells) の チ ロ シ ン リ ン acidification condition の 検 beg: NK others in cell lines (NK3.3) を polystylene beads に solid phase change し た antibodies (Control, CD2, LFA - 1, CD28, Fc gamma R な ど) に よ り bridging stimulus を plus え た. Anti-リ <s:1> acidification チロシ <e:1> antibody を with たWestern Blotting method に よ り, LAT の チ ロ シ ン リ ン acidification condition を 検 out し た. そ の results CD2 bridging stimulus に て, intracellular ア ダ プ タ ー タ ン パ ク LAT の チ ロ シ ン リ ン acidification の raised strong が み ら れ た. CD2 bridging stimulus に お け る LAT の チ ロ シ ン リ ン acidification の raised strong は CD2 の concentration dependence に recognize め ら れ た. ま た CD2 bridge 30 seconds after stimulation で LAT の チ ロ シ ン リ ン acidification が recognize め ら れ, 5 minutes after the strongest で と な る が sure さ れ た. 2) the LAT combining intracellular シ グ ナ ル の 伝 of material with: 1) で ら れ た solubilization タ ン パ ク qualitative を LAT antibody resistance に て immune sink を line い LAT に combining し た intracellular シ グ ナ ル の 伝 of material with fixed line を っ た. そ の results, LAT と p85 と の は, CD2 bridging stimulus dependency で あ り Pl3 - kinase の N terminal SH2 と C terminal SH2 の struck the で recognize め ら れ た. ま た, LAT と PLC - gamma 1 と の combining は CD2 bridging stimulus dependency で あ り PLC - gamma 1 の N terminal S H2とC terminal SH2 is で recognize められた. Today back to の results に よ り, CD2 bridging stimulus に よ が り NK cell activeness さ れ ア ダ プ タ ー タ ン パ ク の LAT が チ ロ シ ン リ ン acidification さ れ る. LAT は p85 や PLC - 1 と combined with gamma し て activeness シ グ ナ ル を 伝 da し て い く こ と が Ming ら か と な っ た.

项目成果

UMEHARA H. et al.: "Role for adapter proteins in costimulatory signal of CD2 and IL-2 on NK cell activation"Moleculer Immunology. 8. 587-596 (2001)

UMEHARA H. 等人：“接头蛋白在 CD2 和 IL-2 共刺激信号对 NK 细胞激活中的作用”分子免疫学。