歯周病原性細菌感染細胞のアポトーシス発現における膜小胞の役割

膜囊泡在牙周病原菌感染细胞凋亡表达中的作用

• 批准号: 13771310
• 负责人: 加藤 幸紀
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Health Sciences University of Hokkaido
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771310/
• 关键词: A. actinomycetemcomitans; 膜小胞; ロイコトキシン; A.actinomycetemcomitans

平成13年度において,A. actinomycetemcomitansより産生される膜小胞には,A. actinomycetemcomitansの有する病原因子のひとつであるロイコトキシンが多く含有されていることが明らかになった。さらに,この膜小胞が宿主細胞へロイコトキシンを媒介する役割を担っている可能性を示した。そこで平成14年度では,膜小胞のヒト免疫細胞へおよぼす影響について検討を行った。本研究では,ヒト免疫細胞として樹立されたヒト骨髄性白血病細胞株であるHL60細胞を用いた。HL60細胞と膜小胞を反応させた後,抗膜小胞抗体を用いて免疫蛍光染色を行い,共焦点レーザー顕微鏡下で観察した。この結果,膜小胞がHL60細胞の細胞膜上に結合する所見が得られた。しかしロイコトキシンはHL60細胞に対して,早期に膜構造を溶解するため,ロイコトキシンを多く含有する膜小胞は,細胞膜に結合した後,すみやかに細胞を溶解してしまう可能性が考えられた。しかしながら,膜小胞添加と同時に抗膜小胞抗体を反応させた場合,あるいはロイコトキシンに対する阻害剤を添加したところ,細胞膜上に結合した膜小胞が観察された。加えて,ロイコトキシン遺伝子を欠落させた細菌株から産生された膜小胞は,HL60細胞と速やかに反応するが,細胞毒性を示さなかった。これらの結果から,膜小胞はロイコトキシンをHL60細胞(宿主免疫細胞)へ媒介するが,ロイコトキシンの存在とは関係なく細胞膜に結合することが明らかになった。

在2001年，据揭示了曲霉曲霉产生的膜囊泡含有大量的亮毒素，这是曲霉曲霉的致病因素之一。此外，结果表明，该膜囊泡可能在将白细胞毒素介导为宿主细胞中起作用。因此，在2002年，我们研究了膜囊泡对人免疫细胞的影响。在这项研究中，使用了HL60细胞，即作为人类免疫细胞的人类髓样白血病细胞系。在与膜囊泡反应后，使用抗膜囊泡抗体进行免疫荧光染色，并在共聚焦激光显微镜下观察到。该结果表明膜囊泡与HL60细胞的细胞膜结合。但是，由于白细胞毒素早日裂解了HL60细胞中的膜结构，因此人们认为含有大量白细胞毒素的膜囊泡在与细胞膜结合后可以迅速裂解细胞。然而，当抗膜囊泡抗体同时反应与膜囊泡的添加，或者添加对亮毒素的抑制剂时，观察到结合在细胞膜上的膜囊泡。此外，缺乏白细胞毒素基因的细菌菌株产生的膜囊泡与HL60细胞迅速反应，但没有细胞毒性。这些结果表明，膜囊泡可介导白细胞毒素至HL60细胞（宿主免疫细胞），但与细胞膜结合，而不论白细胞毒素的存在如何。

项目成果

Satsuki Kato, Yusuke Kowashi, Donald R.Demuth: "Outer membrane-like vesicles secreted by Actinobacillus actinomycetemcomitans are enriched in leukotoxin."Microbial Pathogenesis. 32. 1-13 (2002)

Satsuki Kato、Yusuke Kowashi、Donald R.Demuth：“伴放线放线杆菌分泌的外膜样囊泡富含白细胞毒素。”微生物发病机制。

S Kato, Y Kowashi, DR Demuth: "Outer membrane-like vesicles secreted by Actinobacillus actinomycetemcomitans are enriched in leukotoxin"Microbial Pathigenesis. 32. 1-13 (2002)

S Kato、Y Kowashi、DR Demuth：“伴放线放线杆菌分泌的外膜样囊泡富含白细胞毒素”微生物发病机制。

DR Demuth, D James, Y Kowashi, S Kato: "Interaction of Actinobacillus actinomycetemcomitans outer membrane vesicles with HL60 cells does not require leukotoxin"Cellular Microbiology. 5. 111-121 (2003)

Demuth 博士、D James、Y Kowashi、S Kato：“Actinobacillus actinomycetemcomitans 外膜囊泡与 HL60 细胞的相互作用不需要白细胞毒素”细胞微生物学。