細菌感染マクロファージのアポトーシス発現における一酸化窒素の役割

一氧化氮在细菌感染巨噬细胞凋亡表达中的作用

• 批准号: 11771363
• 负责人: 加藤 幸紀
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Health Sciences University of Hokkaido
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771363/
• 关键词: A.actinomycetemcomitans; マクロファージ; アポトーシス; 一酸化窒素

平成12年度では,A.actinomycetemcomitans感染によりマクロファージがNOを産生する可能性,および産生されたNOが誘導されるアポトーシスにおよぼす影響について検討を行った。まず,感染マクロファージのNO産生について検討した。その結果,感染後3時間よりNO合成酵素(iNOS)mRNAの発現が認められた。また,培養上清中のNO量を測定したところ感染細胞では増加が認められ,NO合成酵素(NOS)の特異的阻害剤であるS-Methyl-ITU(SMT)を添加するとNO量は非感染細胞と同程度にまで減少した。NOSの生成を阻害することによる細胞死への影響の確認は,MTTアッセイによる感染マクロファージの生細胞数および培養上清中の乳酸脱水素酵素量の測定により行い,さらにアポトーシス発現を感染マクロファージのDNA断片化発現を測定することで行った。その結果,SMT添加感染マクロファージでは,阻害剤非添加感染マクロファージに比べ生細胞数の減少,乳酸脱水素酵素量とDNA断片化の増加が認められた。これらの結果をふまえ,細胞内で生成されるNOが細胞死に及ぼす影響について詳細に検討を加えるため,感染マクロファージにおけるカスペース1,3,5,6,8,9活性についても測定を行った。その結果,感染によりいずれのカスパーゼ活性も増加し,SMTを添加することで活性はさらに増加した。これらのことから,感染マクロファージではNOを産生することが確認され,阻害剤の添加によりカスパーゼ活性とDNA断片化が増加することから,感染により産生されたNOはカスパーゼ活性を一部不活化することでアポトーシスの誘導を調節している可能性が示唆された。

Heisei 12 years ago, A. actinomycetemcomitans infection infection disease Produce the possibility of する, およびproduce されたNOがinducing されるアポトーシスにおよぼすeffect について検椒行った.まず, infection of マクロファージのNO produces について検検问した. As a result, INO synthase (iNOS) mRNA was detected 3 times after infection.また, determination of the amount of NO in the culture supernatant, detection of infected cells, recognition of NO synthase (NOS), The inhibitory agent, S-Methyl-ITU (SMT), was added to the same amount of NO as the non-infected cells and was reduced to the same extent. Confirmation of the impact of NOS generation and inhibition on cell death, MTT infection and the number of cells produced in the culture supernatant Determination of the amount of lactate dehydratase enzyme Infectious DNA fragmentation test is used to measure the infection. As a result, SMT adds infection to the virus, and the blocking agent does not add infection to the virus. It is recognized that the number of raw cells is reduced, the amount of lactate dehydratase enzyme and DNA fragmentation are increased.これらのRESULTをふまえ, intracellular productionされるNOがcell deathにandぼすeffectについてdetailsに検 Discussionをaddえるため, infected マクロファージにおけるカスペース1,3,5,6,8,9 activity についてもdetermination を行った.そのRESULTS, INFECTION によりいずれのカスパーゼACTIVE もincrease and し, SMTをADD することでACTIVITY はさらに嗗add した.これらのことから, infection of マクロファージではNOをproduced することがOK Recognize and inhibit the addition of inhibitors to the activity and DNA fragmentation.ることから, infection によりproduces されたNOはカスパーゼactiveを一不vi化することでアポトーシスのinducingをregulationしているpossibilityがshows instigationされた.