細菌感染マクロファージのアポトーシス発現における一酸化窒素の役割

一氧化氮在细菌感染巨噬细胞凋亡表达中的作用

• 批准号: 11771363
• 负责人: 加藤 幸紀
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Health Sciences University of Hokkaido
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771363/
• 关键词: A.actinomycetemcomitans; マクロファージ; アポトーシス; 一酸化窒素

平成12年度では,A.actinomycetemcomitans感染によりマクロファージがNOを産生する可能性,および産生されたNOが誘導されるアポトーシスにおよぼす影響について検討を行った。まず,感染マクロファージのNO産生について検討した。その結果,感染後3時間よりNO合成酵素(iNOS)mRNAの発現が認められた。また,培養上清中のNO量を測定したところ感染細胞では増加が認められ,NO合成酵素(NOS)の特異的阻害剤であるS-Methyl-ITU(SMT)を添加するとNO量は非感染細胞と同程度にまで減少した。NOSの生成を阻害することによる細胞死への影響の確認は,MTTアッセイによる感染マクロファージの生細胞数および培養上清中の乳酸脱水素酵素量の測定により行い,さらにアポトーシス発現を感染マクロファージのDNA断片化発現を測定することで行った。その結果,SMT添加感染マクロファージでは,阻害剤非添加感染マクロファージに比べ生細胞数の減少,乳酸脱水素酵素量とDNA断片化の増加が認められた。これらの結果をふまえ,細胞内で生成されるNOが細胞死に及ぼす影響について詳細に検討を加えるため,感染マクロファージにおけるカスペース1,3,5,6,8,9活性についても測定を行った。その結果,感染によりいずれのカスパーゼ活性も増加し,SMTを添加することで活性はさらに増加した。これらのことから,感染マクロファージではNOを産生することが確認され,阻害剤の添加によりカスパーゼ活性とDNA断片化が増加することから,感染により産生されたNOはカスパーゼ活性を一部不活化することでアポトーシスの誘導を調節している可能性が示唆された。

In 2012,A.actinomycetemcomitans infection caused the possibility of NO production, and NO production induced the possibility of NO production. The infection was caused by NO generation. As a result, the expression of NO synthase (iNOS)mRNA was detected 3 days after infection. NO levels in culture supernatants were measured and increased in infected cells. NO synthase (NOS) was specifically inhibited by the addition of S-Methyl-ITU(SMT) and NO levels decreased in non-infected cells to the same extent. To confirm the effect of NOS production inhibition on cell death,MTT assay was used to determine the number of infected cells and the amount of lactate dehydrin culture supernatant, and DNA fragmentation assay was used to determine the occurrence of NOS. As a result,SMT added to the infection caused a decrease in the number of viable cells and an increase in the amount of lactic acid dehydratase and DNA fragmentation. The results of this study include: intracellular production of NO, cell death, and infection. As a result, the activity of the infected cells increased, and the activity of SMT increased. The possibility of NO production, inhibition of DNA fragmentation, and inhibition of NO production, inactivation of NO production, and inhibition of NO induction, is demonstrated.