細菌感染マクロファージのアポトーシス発現における一酸化窒素の役割

一氧化氮在细菌感染巨噬细胞凋亡表达中的作用

• 批准号: 11771363
• 负责人: 加藤 幸紀
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Health Sciences University of Hokkaido
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771363/
• 关键词: A.actinomycetemcomitans; マクロファージ; アポトーシス; 一酸化窒素

平成12年度では,A.actinomycetemcomitans感染によりマクロファージがNOを産生する可能性,および産生されたNOが誘導されるアポトーシスにおよぼす影響について検討を行った。まず,感染マクロファージのNO産生について検討した。その結果,感染後3時間よりNO合成酵素(iNOS)mRNAの発現が認められた。また,培養上清中のNO量を測定したところ感染細胞では増加が認められ,NO合成酵素(NOS)の特異的阻害剤であるS-Methyl-ITU(SMT)を添加するとNO量は非感染細胞と同程度にまで減少した。NOSの生成を阻害することによる細胞死への影響の確認は,MTTアッセイによる感染マクロファージの生細胞数および培養上清中の乳酸脱水素酵素量の測定により行い,さらにアポトーシス発現を感染マクロファージのDNA断片化発現を測定することで行った。その結果,SMT添加感染マクロファージでは,阻害剤非添加感染マクロファージに比べ生細胞数の減少,乳酸脱水素酵素量とDNA断片化の増加が認められた。これらの結果をふまえ,細胞内で生成されるNOが細胞死に及ぼす影響について詳細に検討を加えるため,感染マクロファージにおけるカスペース1,3,5,6,8,9活性についても測定を行った。その結果,感染によりいずれのカスパーゼ活性も増加し,SMTを添加することで活性はさらに増加した。これらのことから,感染マクロファージではNOを産生することが確認され,阻害剤の添加によりカスパーゼ活性とDNA断片化が増加することから,感染により産生されたNOはカスパーゼ活性を一部不活化することでアポトーシスの誘導を調節している可能性が示唆された。

在2000年，我们调查了巨噬细胞因感染曲霉曲霉而产生的可能性，以及产生的NO对诱导细胞凋亡的影响。首先，未研究感染巨噬细胞的产量。结果，感染后3小时观察到NO合酶（Inos）mRNA的表达。此外，当测量培养上清液中的NO量时，在感染细胞中观察到增加，并且添加了NO合酶（NOS）的特定抑制剂S-甲基ITU（SMT）时，NO的量降低到与未感染的细胞的水平相同。通过使用MTT测定法测量抑制NOS产生对细胞死亡的影响，通过测量感染巨噬细胞的活细胞数量以及培养上清液中乳酸脱氢酶的量，并通过测量感染巨噬细胞的DNA碎片表达来进一步测量凋亡表达。结果，与没有抑制剂的巨噬细胞相比，在感染了SMT的巨噬细胞中，活细胞数量减少，乳酸脱氢酶量和DNA片段的增加。基于这些结果，为了进一步研究细胞中的NO对细胞死亡的影响，我们还测量了CASPACE 1，3，5，6，8，9在感染巨噬细胞中的活性。结果，感染增加了caspase活性，并且通过添加SMT而进一步增加了活性。这些结果证实，在感染的巨噬细胞中产生了NO，抑制剂的添加增加了caspase活性和DNA碎片化，这表明通过感染产生的NO可以通过部分失活caspase活性来调节凋亡的诱导。