アミノアシルtRNA合成酵素を標的とした抗生物質に対する耐性メカニズム

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本研究では初めに、トリプトファニルtRNA合成酵素(TrpRS)の阻害剤であるインドールマイシン(IM)に対する耐性株が、IM生産株を含む放線菌属の間に広く分布していることを示した。耐性株の一つS. coelicolor A3(2)のゲノム配列より、2つのTrpRS遺伝子を見いだした。これらのうちTrpRS1と名付けた遺伝子を発現させると大腸菌がIM耐性に転化したため、TrpRS1が放線菌のIM耐性の決定因子であると考えられた。TrpRS2は、TrpRS1と同様に大腸菌のTrpRS温度感受性株を相補するが、発現させてもIM耐性は見られなかった。これら2つのTrpRSの相違点より、TrpRS1のN末9番目に位置するリジンが耐性に関与していることが示唆された。この残基はアミノ酸認識ポケットの入り口に位置し、立体障害および静電反発力によってIMの活性部位への侵入を阻止していると考えられる。この残基を置換した変異体がIM耐性能を失うことから、この残基がTrpRS1の耐性に欠かせないことが明らかになった。また反応速度論的解析から、TrpRS1がTrpRS2の百倍以上の耐性を獲得すると同時に、活性部位の変異のために基質トリプトファンに対する認識がTrpRS2より低下していることが明らかになった。RT-PCRを用いた転写産物の解析を行うと、通常の増殖期には感受性だが活性の高いTrpRS2のmRNAが発現しており、培地にIMを加えると活性が低いが耐性のあるTrpRS1のmRNAが誘導されてくることが分かった。以上の結果から、(1)活性部位の変異による抗生物質の排除メカニズム(2)変異による本来の基質への親和性低下(3)耐性酵素の機能低下を補助するための「スペア」酵素の存在(4)抗生物質による新たな機構の遺伝子発現制御、の四つの点について、これまでにない知見を得ることができた。