放射能の核移行を目的としたタンパク質標識試薬の開発

放射性核转位蛋白质标记试剂的开发

基本信息

批准号：
13771409
负责人：
上原知也
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

近年,核移行性ペプチドと膜を通過しない蛋白質を結合させた融合蛋白質が,細胞膜を通過することが報告された.しかし,抗腫瘍抗体フラグメント等の標的指向性の蛋白質と核移行性ペプチドをそのまま結合させただけでは,核移行性ペプチドの性質による非特異的な組織への集積が増えることが示されている.そこで本課題では,核移行性ペプチドに塩基性アミノ酸が多数含まれていることに注目し,ペプチド全体の塩基性を減弱させるために酸性アミノ酸を繋げることにより非特異的な細胞浸潤を抑え,細胞に取り込まれた後,細胞内代謝により塩基性アミノ酸配列のみを遊離するペプチドの設計を行った.これにより細胞外では母体蛋白質の動態を,細胞内では核移行性ペプチドの動態を持つ試薬が出来ると考えた.核移行性の塩基性アミノ酸部位としてリソソーム代謝に安定なD体アミノ酸を基本とし,膜透過と核移行が知られている(D-Arg)_7を選択した.また酸性アミノ酸として強酸性のスルホニル基を有する[Tyr(SO_3H)]を選択し,モデルペプチドとしてAc-[Tyr(SO_3H)]_4-Gly-Lys-Gly-Tyr-(D-Arg)_7-Lys(FITC)-CONH_2を設計,合成した.本モデルペプチドを用いて(D-Aeg)_7の塩基性を[Tyr(SO_3H)]_4により減弱させたことによる膜透過に及ぼす影響を検討した.細胞への取り込みを検討したところ,強酸性基を有するTyr(SO_3H)があるにも関わらず,細胞への取り込みが観察された.又この取り込みは低温下でも低下しなかったことから,(D-Arg)_7の膜透過性が維持されていると考えられた.本結果は,核移行部位である(D-Arg)_7の作用は強力でありその作用を打ち消すためには更なる酸性基の導入が必要と考えられた.さらにその作用の強さ故に血液循環中はその作用をマスクするという本研究方針は有用であると考えられる.

最近，据报道，将核传输肽与未穿过膜的蛋白结合的融合蛋白可以通过细胞膜。然而，已经表明，由于核传播肽的性质，简单地结合靶指导蛋白（例如抗肿瘤抗体片段）会增加非特异性组织的积累。因此，在这个主题中，我们关注的事实是，核传输肽含有许多碱性氨基酸，并衰减整个肽的碱性，酸用于减轻整个肽的碱性。通过连接性氨基酸，可以抑制非特异性细胞侵袭，并被细胞吸收后，肽被设计为仅通过细胞内代谢释放碱性氨基酸序列。人们认为这使试剂能够在细胞外的母体蛋白质和细胞内的核转移肽的动力学。我们选择了D-ARG_7，该D-ARG_7基于溶酶体代谢稳定的D体氨基酸，并以膜渗透和核易位而闻名。我们还选择了酸性氨基酸。选择了具有强酸性磺酰基组的[Tyr（SO_3H）]，并设计并合成为模型肽，并设计并合成了Ac- [Tyr（SO_3H）] _ 4-gly-lys-lys-gly-tyr-（d-arg）_7-lys（fitc）-conh_2 -conh_2。使用此模型肽，研究了使用[Tyr（SO_3H）] _ 4在膜渗透中衰减（D-AEG）_7的碱性的影响。研究了对细胞的摄取，发现它具有强酸性基团。尽管有一个Tyr（SO_3H），但观察到对细胞的摄取。此外，即使在低温下，这种摄取也不会降低，因此人们认为（D-ARG）_7的膜渗透性得以维持。该结果表明，（D-ARG）_7的作用是核易位部位强，并且必须引入进一步的酸性基团以抵消它。此外，由于其作用的强度，该研究政策掩盖了在血液循环期间的作用，因此被认为是有用的。