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哺乳類細胞の複製前クロマチン上に形成されるDNA複製装置複合体の分子構築

哺乳动物细胞复制前染色质上形成的 DNA 复制装置复合体的分子构建

基本信息

批准号：
13780516
负责人：
水野武
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

哺乳類細胞の複製前複合体及びそこに形成される複製装置複合体の分子構築を明らかにするために、マウスの複製因子複合体を標的とし、含まれる因子の探索と核内に於ける機能解析を試みた。酵母two-hybrid法により、DNAポリメラーゼα、ε、ORC, MCM, Cdc45を含めた20種類以上の複製因子間の相互作用を検討した。ヒトMcm10及びマウスCdt1がORC, MCM4,MCM6,DNAポリメラーゼα等と相互作用する事を見出し、Mcm10、Cdt1を中心とした複製因子間の分子ネットワークを高等真核生物において始めて示唆する結果を得た。また、DNAポリメラーゼ結合因子として新規複製関連因子,特に核骨格とのリンクに関わる因子を探索した。マウス初期胚由来のcDNAライブラリーの検索を行った結果、機能未知因子に加え、核骨格結合因子、クロマチンリモデリング因子等多数の因子がポリメラーゼ、もしくは複製開始因子に結合するタンパク質として単離された。中でも、ヒストンデアセチラーゼ複合体の構成因子SAP18をDNAポリメラーゼεに結合する因子として同定した。SIN3-SAP18複合体がS期において複製装置複合体と巨大な複合体を形成する事も見出し、DNAポリメラーゼを含む複製装置複合体とヒストンデアセチラーゼ複合体との相互作用を示唆する興味深い知見となった。一方、マウスCdt1の機能解析の結果、Cdt1のN末293アミノ酸が配列、構造に非特異的なDNA結合活性を有する事、その活性がgemininによって阻害されることを見出した。複製前複合体の分子構築の理解をうえで重要な知見となった。

The molecular architecture of the replicative apparatus complex in mammalian cells and the formation of the replicative apparatus complex in mammalian cells were investigated. Yeast two-hybrid method to investigate the interaction between DNA replication factors α, ε, ORC, MCM, Cdc45 and more than 20 species The interaction between Mcm10 and Cdt1, Mcm4, Mcm6,DNA molecules and replication factors was observed. DNA binding factors and replication related factors, especially nuclear DNA binding factors Most of the factors such as the gene sequence of cDNA origin, function unknown factor, nuclear skeleton binding factor, and replication initiation factor are mixed and separated. The composition factor SAP18 of the complex is the same as that of the complex. The SIN3-SAP18 complex is a complex of S phase replicators and giant complexes. The interaction between these complexes and DNA is interesting. The results of functional analysis of Cdt1, N293-amino acid alignment of Cdt1, and non-specific DNA binding activity and geminin activity were presented. Understanding the molecular architecture of pre-replicative complexes is important.