前駆体タンパク質プロセシング酵素PACE4の細胞外マトリックス局在化機構の解析

前体蛋白加工酶PACE4的细胞外基质定位机制分析

• 批准号: 13780508
• 负责人: 黒田 理恵子
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780508/
• 关键词: SPC; 成熟化; 分泌; 細胞外マトリックス

細胞の様々な生理現象の制御を行う分化・増殖因子の多くは、細胞外マトリックス(ECM)内で活性化され機能することが知られている。PACAE4はこれらの因子の活性化に深く関わる分泌型酵素で、近年当研究室によりECMにも存在することが示された。PACE4は分泌蛋白質だが、培養細胞に一過性に発現させた場合、成熟及び分泌効率は非常に低い。一方、C末端25残基を欠損させた変異体(Δ945)は効率良く成熟化し分泌されるが、野生型に比べECMへの存在量が少ない。そこで、C末端部のECM局在化への影響について細胞内、細胞外の2つの視点で解析した。欠損させたC末端部はExon25中にコードされているため、解析ではこの部位(Ex.25)に注目した。1.細胞内での役割 PACE4の成熟化に与える影響を解析するため、YFP蛋白質のC末端にEx.25を結合させた融合蛋白(YFP-Ex.25)を作成しΔ945と共発現させた。その結果Ex.25はΔ945と相互作用し分泌効率を低下させた。そこでPro配列等PACE4の種々の部位の欠損体を構築し、YFP-Ex.25との相互作用を確認した結果、Ex.25は触媒部位、またはそのC末端側で活性を調節すると予想されるHomoB部位と相互作用している可能性が示された。2.細胞外での役割 カラムを用いた研究よりPACE4とΔ945はどちらもヘパリンに結合することがわかった。しかし培養細胞の研究より、ラミニン処理した培養器を用いた場合野生型PACE4はECMへの局在が顕著に増加するのに対しΔ945は変化せず非常に少なかったため、Ex.25とラミニンの相互作用についてヒト血清アルブミン(HSA)との融合蛋白質(HSA-Ex.25)を構築し解析を行っている。HSA-Ex.25はHSAに比べ培地中の存在量が減少し、細胞内あるいはECMの存在量が増加した。現在さらに詳細な解析を行っている。

The regulation of physiological phenomena in cells and the activation of proliferation factors in extracellular matrix (ECM) PACAE4 has been shown to be active in secreted enzymes in recent years. PACE4 secretes proteins at very low rates of transient, maturation and secretion in cultured cells. The mutant (Δ945) was found to be deficient in one or more C-terminal residues, and was less abundant in the wild type than in the mature ECM. The C-terminal part of the ECM is affected by the intracellular and extracellular factors. The missing part of the C terminal is Exon25, and the analysis part is Exon 25. 1. Analysis of the effects of intracellular cleavage on the maturation of PACE4 and the formation of fusion protein (YFP-Ex. 25) at the C-terminal of YFP protein Ex.25 Δ945 interaction and secretion rate decrease. Construction of defective bodies at the seed sites of PACE4, such as Pro alignment, and confirmation of the interaction between YFP-Ex.25 and Ex.25 catalyst sites, as well as the possibility of regulating the activity of the C-terminal side of ACE 4, are expected. 2. Extracellular cell culture is used in research on PACE4 and Δ945. The analysis of wild type PACE4 ECM fusion protein (HSA) and fusion protein (HSA-Ex.25) was carried out in the study of cultured cells, in the treatment of cultured cells and in the use of incubators. HSA-Ex.25 decreased the amount of HSA in the culture medium and increased the amount of ECM in the cells. Now the detailed analysis of the line.