膵癌に対するハンマーヘッド型リボザイムを用いたテロメラーゼ活性抑制療法の試み

使用锤头核酶抑制端粒酶活性治疗胰腺癌的试验

• 批准号: 13877207
• 负责人: 横山 隆
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13877207/
• 关键词: テロメラーゼ; リボザイム; hTR; アポトーシス; テロメア; 膵癌; 遺伝子導入; 遺伝子治療

現有するヒト膵癌培養細胞8株を用いて、ハンマーヘッド型リボザイムのテロメラーゼ活性の抑制効果を検討した。リボザイム構造を有するRNAの鋳型であるDNAから、試験管内でRNAに転写してハンマーヘッド型リボザイムを作製し、DOTAPを用い膵癌培養細胞に導入した.その後、48時間後にそれらの細胞のテロメラーゼ活性をTRAP assayにより測定したところ、8株中2株で明らかなテロメラーゼ活性の低下を認めた。これらの2株はその後1週間以内に細胞のほとんどが死滅した。他の6株では、テロメラーゼ活性に変化はなかったが、3株で増殖能の低下を認めた。これらの細胞株をハンマーヘッド型リボザイム処理後、TUNEL法によってアポトーシスの誘導について検討したところ、テロメラーゼ活性が低下した2株では、TUNEL陽性細胞30%以上を占め、明らかにアポトーシスが誘導されていた。他の増殖能が低下した3株では、やはりアポトーシスが誘導されていた。これらの細胞でテロメア検討するとテロメア長の明らかな短縮は認められなかった。さらに、遺伝子導入により、この配列をベクター(pH β APr-1-neo)に導入し、膵癌培養細胞でハンマーヘッド型リボザイムを恒久的に発現させる系を樹立し、これらの細胞のテロメラーゼ活性を測定した結果その低下を認め、さらにその後6-7日でほとんどの細胞は死滅した。ベクターのみを導入した細胞株が軽度の増殖能低下であったことから、リボザイムによるhTR抑制が細胞死を来したと考えられ、そのメカニズムについて解明する目的で、これらの細胞でのテロメア長、hTR・hTERT発現について詳細に検討中である。

At present, there are 8 strains of cancer culture cells that can be used to inhibit the activity of cancer cells. There are several types of cancer, such as RNA, DNA, RNA, DOTAP, cancer culture, and so on. After 48 and 48 hours, the activity of TRAP assay was determined by Elisa, and the activity of 2 of the 8 strains was confirmed to be low. The cells of 2 strains were killed within 1 year after incubation. The colonization ability of 6 strains and 3 strains were lower than that of other strains. After treatment, the TUNEL method showed that the activity of the cell line was lower than that of the control group (2 strains), the percentage of the sexual cell of TUNEL was more than 30%, and the activity of the cell line was low. The colonization of other plants was able to lower the growth rate of 3 strains, and the plant was able to induce the growth of three strains. I don't know what to do. I don't know. I don't know. I don't know. The results of the determination of the activity of the cells were determined by the results of the determination of the activity of the cells, the results of the determination of the activity of the cells, the results of the determination of the activity of the cells, the results of the determination of the activity of the cells, the results of the determination of the activity of the cells, the results of the determination of the activity of the cells, the results of the tests showed that the cells died 6-7 days later. The results showed that the growth rate of the cell line was higher than that of the control group, and the growth rate of the cell strain was lower than that of the control group. The growth rate of the cell strain was lower than that of the control group, and the hTR inhibited the death of the cell. The purpose of this study is to understand the purpose, the growth rate of the cell, and the effect of hTR. HTERT.

项目成果

Hiyama K. et al.: "Non-RI Protocols for L-myc allelotyping and deletion mapping of chromosome 1p in primary lung cancers"Humana Press (in press). (2002)

Hiyama K. 等人：“原发性肺癌中 L-myc 等位基因分型和染色体 1p 缺失图谱的非 RI 方案”Humana Press（正在印刷中）。

Hiyama K.et al.: "Lung Cancer (Methods in Molecular Medicine series)"Detection of telomerase activity in lung cancer tissues(in press). (2002)

Hiyama K.等：《肺癌（分子医学方法系列）》肺癌组织中端粒酶活性的检测（出版中）。

Hiyama E., et al.: "Immunohistocheical detection of telornerase (hTERT) in human cancer tissues and a subset of cells in normal tissues"Neoplasia. 3・1. 17-26 (2001)

Hiyama E.等人：“人类癌症组织和正常组织中的细胞子集的端粒酶（hTERT）的免疫组织化学检测”Neoplasia 3・1（2001）。