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ニューロン変性や細胞死の早期兆候を知る(lacZ-EM法)

了解神经元变性和细胞死亡的早期迹象（lacZ-EM 方法）

基本信息

批准号：
13878159
负责人：
杉本哲夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13878159/
关键词：
lacZ β-ガラクトシダーゼノックアウトマウスニューロン変性

项目摘要

ニューロン死の機序を明らかにすることは脳病態を解明する上で意義が大きい。成熟脳において特定のニューロンの変性を来すノックアウトマウスに着目し、ニューロン死の早期兆候を知る方法の開発を企図した。ニューロン変性や細胞死は一定の週齢以降に誘発されるため、幼弱期において脳のlacZ発現細胞を電子顕微鏡下に観察した。発現しているlacZをβ-ガラクトシダーゼ組織化学法により高感度検出する方法を確立した。方法の特色を下に列記した。これまでのlacZ検出法は主にlacZが過剰発現している遺伝子変異マウスの細胞においてなされているが、本法はノックアウトマウスにおいてターゲット遺伝子をlacZカセットにより置換した例にも適用し得たため、より高感度で実用的な方法と考えられた。今回用いたlacZ-EM法の特色(概要):1.パラフォルムアルデヒド潅流固定(グルタールアルデヒドは検出感度低下を来すので省略した)。2.X-gal反応(Houtani et al.,J.Comp.Neurol.,424(3)489-508,2000による)。3.後固定(グルタールアルデヒドとオスミウムを使用)。4.脱水(プロピレンオキシドは検出感度低下を来すので省略した)。ノシセプチン受容体遺伝子欠損マウス(ホモ接合体)の視床下部腹内側核にて本法を適用したところ、細胞体に高電子密度の顆粒が局在しているニューロンを明瞭に識別することが可能であった。

The mechanism of death is clear, the disease is clear, and the significance is great. Development of a method for identifying and identifying early warning signs in a mature environment The cells were observed under electron microscope during the early stages of development. The method of high sensitivity detection was established by histochemical method. The method features are listed below. The method of lacing Z can be used to detect the presence of different genes in cells. Features of Z-EM method used in this paper (summary):1. Fixed flow rate (low sensitivity) 2.X-gal (Houtani et al., J.Comp.Neurol., 424(3)489-508,2000による)。3. After fixing (the group is lost), it is used. 4. Dehydration is the most common cause of low sensitivity. This method is applicable to the ventral medial nucleus of the inferior optic bed in the receptor receptor, and it is possible to identify particles with high electron density in the cell body.