ホルムアルデヒドによって誘発されるDNA付加体の定量法の開発

甲醛诱导的 DNA 加合物定量方法的开发

• 批准号: 02J01635
• 负责人: 安井 学
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J01635/
• 关键词: ホルムアルデヒド; DNA損傷; DNA付加体; 突然変異; LC; MS; 塩基置換; ^<32>P-ポストラベル法; バイオマーカー

ホルムアルデヒドの環境汚染が問題となる一方、内因性のホルムアルデヒドの影響も解明する必要がある状況で、N^2-Methly-2'-deoxyguanosine(N^2-Me-dG)をホルムアルデヒド人体曝露のバイオマーカーに利用することを目的とした。本研究の結果、N^2-Me-dGの定量法を確立し、N^2-Me-dG損傷によって引き起こされる誤塩基対形成パターンと頻度を明らかにした。得られた研究成果は以下のように要約される。(1)LC/MS/MSによる実用的なN^2-Me-dGの定量法を確立した。(2)ホルムアルデヒド未処理の培養細胞DNAからN^2-Me-dGを10^7塩基あたり1.1個検出することに成功した。このことからN^2-Me-dGは内因性のDNA損傷であることが、本研究によって初めて判明した。(3)ホルムアルデヒド曝露した培養細胞DNAから検出されたN^2-Me-dGは、その曝露濃度に依存して増加した。よってN^2-Me-dGがホルムアルデヒド曝露のバイオマーカーとして使用できることを明らかにした。(4)N^2-Me-dGが主にG→A塩基置換の突然変異を誘発するDNA損傷であることを、in vitro実験系を用いて証明した。以上のように、本研究はホルムアルデヒドに起因する発癌リスク算定の根拠となる基礎資料を提供し、また分子疫学のバイオマーカーとして利用するための実践的な方法を確立した。また本研究は、内因性DNA損傷の突然変異寄与率を解明するという大きな目標を達成させるためにスタートさせた。そこでN^2-Me-dGに加えて、他の内因性DNA損傷(Nitric Oxideおよび女性ホルモンのDNA損傷)についても突然変異誘発能を解析している。

ホ ル ム ア ル デ ヒ ド の が environmental pollution problems と な る side, endogenous の ホ ル ム ア ル デ ヒ ド の influence も interpret す る necessary が あ る で, N ^ 2 - Methly - 2 '- deoxyguanosine (N ^ 2 - Me - dG) を ホ ル ム ア ル デ ヒ ド human exposure の バ イ オ マ ー カ ー に using す る こ と を mesh Youdaoplaceholder0 た. の results of this research, N ^ 2 - Me - dG の を quantitative method to establish し, N ^ 2 - Me - dG damage に よ っ て lead き up こ さ れ る mistakenly salt base forming パ seaborne タ ー ン と frequency を Ming ら か に し た. Obtain られた research results the following is an offer from ように される. (1)LC/MS/MSによる uses the なN^2-Me-dG <s:1> quantitative method を to establish た た. (2) ホ ル ム ア ル デ ヒ ド not 処 Richard の culture cell DNA か ら N ^ 2 - Me - dG を 10 ^ 7 salt base あ た り 1.1 検 out す る こ と に successful し た. <s:1> <s:1> と と らN^2-Me-dG <s:1> endogenous <s:1> DNA damage である とが とが in this study によって めて initially めて determined that it is た. (3) ホ ル ム ア ル デ ヒ ド exposure し た culture cell DNA か ら 検 out さ れ た N ^ 2 - Me - dG は, そ に の exposure concentration dependent し て raised plus し た. よ っ て N ^ 2 - Me - dG が ホ ル ム ア ル デ ヒ ド exposure の バ イ オ マ ー カ ー と し て use で き る こ と を Ming ら か に し た. (4) N ^ 2 - Me - dG が main に G - A salt base displacement の suddenly - different を 発 lure す る DNA damage で あ る こ と を, the in vitro be を 験 department with い て prove し た. Above の よ う に, this study は ホ ル ム ア ル デ ヒ ド に cause す る 発 carcinoma リ ス ク consider の root 拠 と な based data を provide し, ま る た molecular epidemiology の バ イ オ マ ー カ ー と し て using す る た め の be practice を な method establish し た. ま た は, endogenous DNA damage, this study の suddenly - different send rate を interpret す る と い う big き な target を reached さ せ る た め に ス タ ー ト さ せ た. そ こ で N ^ 2 - Me - dG に plus え て, he の endogenous DNA damage (Nitric Oxide お よ び women ホ ル モ ン の DNA damage) に つ い て も suddenly - different 発 can lure を parsing し て い る.

项目成果

安井 学: "Mutagenic events induced by 4-hydroxyequilin in supF shuttle vector plasmid propagated in human cells."Carcinogenesis. 24. 911-917 (2003)

Manabu Yasui：“在人类细胞中传播的 suF 穿梭载体质粒中由 4-羟基马烯肽诱导的诱变事件。”致癌作用。

安井 学: "Translesional synthesis on a DNA template containing N^2-methyl-2'-deoxyguanosine catalyzed by the Klenow fragment of Escherichia coli DNA polymerase I."Nucleic Aclds Res.. 29. 1994-2001 (2001)

Manabu Yasui：“大肠杆菌 DNA 聚合酶 I 的 Klenow 片段催化的含有 N^2-甲基-2-脱氧鸟苷的 DNA 模板上的跨损伤合成。”Nucleic Aclds Res.. 29. 1994-2001 (2001)

安井 学: "Mutagenic events induced by 4-hydroxyequilin in SupF Shuttle vector plasmid propagated in human cells"Carcinogenesis. (in press). (2003)

Manabu Yasui：“在人类细胞中传播的 SupF 穿梭载体质粒中诱导的诱变事件”（正在出版）。