透析膜を利用した新しい代謝活性化システムによるDNA付加体の形成と同定

使用透析膜的新型代谢激活系统形成和鉴定 DNA 加合物

• 批准号: 21K12263
• 负责人: 安井 学
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: National Institute of Health Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K12263/
• 关键词: DNA付加体; 代謝活性化; 薬物代謝酵素; S9; 変異原性物質; 薬物代謝; in vitro; 遺伝毒性

変異原性物質（4種）、ラット肝S9、核酸塩基dNの各最適濃度、およびHPLC分離条件の最適化について、様々な実験より得られたデータから反応系の条件をほぼ決定した。しかしながら、現段階において、DNA付加体と予想される候補のHPLCピーク面積は非常に小さく、収率は高くないことが分かった。そこで、各変異原性物質のDNA付加体を効率良く形成させるために、S9に含有する第Ⅱ相薬物代謝酵素（硫酸転移酵素など）を機能させるアプローチを考えた。その予備実験として、まず、簡易に実行できるin vitro小核試験法を使って、S9 mix存在下でPAPS（3'-ホスホアデノシン-5'-ホスホ硫酸）補因子を補充し、S9中の硫酸転移酵素が正しく機能するかを確認した。その際の間接変異原物質は、第Ⅰ相代謝反応後に第Ⅱ相反応で硫酸抱合体を形成するとされているアリストロキア酸を用いた。その結果、PAPS補充群の小核形成頻度は、そのPAPS非補充群のそれよりも高い遺伝毒性を示した。つまり、アリストロキア酸は、硫酸抱合体を介することで、より効率良くDNA付加体を増加させたと考えられた。今後、このアリストロキア酸のDNA付加体形成能を確認できたPAPS補充型in vitro小核試験と同じ条件下で、透析膜を使ったDNA付加体形成実験を実施する予定である。

The optimum concentration of heterogenic substances (4 kinds), nucleic acid S9 and nucleic acid dN, and the optimization of HPLC separation conditions were determined. The area of the candidate HPLC is very small and the ratio is high. The DNA donor of each heterologous substance is well formed and S9 contains the second phase metabolic enzyme (sulfate transfer enzyme). In addition, PAPS (3'-sulfo-5 '-sulfo-4) supplement factor was supplemented in the presence of S9 mix, and the function of sulfate transfer enzyme in S9 was confirmed. In addition, the indirect transformation of foreign substances into sulfuric acid complexes in phase I and phase II metabolism is also discussed. The results showed that the frequency of micronuclei formation in PAPS complement group was higher than that in PAPS non-complement group. The number of DNA donors increased by 20 percent. In the future, the ability to form DNA adducts in vitro was confirmed and PAPS supplementation was performed under the same conditions as in dialysis membrane.

项目成果

Potent mutagenicity of azidoglycerol in human TK6 cells

叠氮甘油对人 TK6 细胞的强致突变性

• 发表时间: 2022
• 作者: Gruz P;Yasui M;Ukai A;Horibata K;Honma M;Sugiyama KI.
• 通讯作者: Sugiyama KI.

Follow-up genotoxicity assessment of Ames-positive/equivocal chemicals using the improved thymidine kinase gene mutation assay in DNA repair-deficient human TK6 cells

在 DNA 修复缺陷的人 TK6 细胞中使用改进的胸苷激酶基因突变测定法对 Ames 阳性/模棱两可的化学物质进行后续遗传毒性评估

• DOI: 10.1093/mutage/geab025
• 发表时间: 2021
• 期刊: Mutagenesis
• 影响因子: 2.7
• 作者: A. Sassa;T. Fukuda;A. Ukai;M. Nakamura;R. Sato;S. Fujiwara;K. Hirota;S. Takeda;K.I. Sugiyama;M. Honma;M. Yasui
• 通讯作者: M. Yasui

Potent mutagenicity of an azide, 3-azido-1,2-propanediol, in human TK6 cells

叠氮化物 3-叠氮基-1,2-丙二醇对人 TK6 细胞的强致突变性

• DOI: 10.1016/j.mrgentox.2022.503475
• 发表时间: 2022
• 期刊: Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis
• 作者: Gruz Petr;Yasui Manabu;Ukai Akiko;Horibata Katsuyoshi;Honma Masamitsu;Sugiyama Kei-ichi
• 通讯作者: Sugiyama Kei-ichi

Data Independent Acquisition法によるトキシコプロテオミクスの統合型in vitro遺伝毒性試験の試みと問題点

使用数据独立采集方法进行毒性蛋白质组学体外遗传毒性综合测试的尝试和问题

• 发表时间: 2022
• 作者: 安井学;鵜飼明子;足立淳;鈴木孝昌;本間正充;杉山圭一
• 通讯作者: 杉山圭一

MGMT持続発現型TK6細胞を用いた遺伝毒性試験のための基礎的研究

使用持续表达 MGMT 的 TK6 细胞进行遗传毒性测试的基础研究

• 发表时间: 2021
• 作者: 安井学;佐々彰;鵜飼明子;足立淳;鈴木孝昌;本間正充;杉山圭一
• 通讯作者: 杉山圭一