ニューロンにおける神経活動依存的な遺伝子発現を介したシナプス形成機構の解析

神经元神经活动依赖性基因表达介导的突触形成机制分析

• 批准号: 02J02046
• 负责人: 鈴木 一典
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J02046/
• 关键词: 小脳顆粒細胞; NR2C; 脳由来神経栄養因子; ERKシグナリング; 脱分極; カルシニューリン; シナプス形成

本年度は、マウス小脳顆粒細胞初代培養における脳由来神経栄養因子(brain-derived neurotrophic : BDNF)刺激(50ng/ml 96時間)による、TrkB-ERKシグナリングを介した、N-metyl-D-aspartate (NMDA)受容体NR2Cサブユニットの発現誘導とカルシニューリンジグナリングによるその制御について、さらなる解析を行った。細胞表面タンパク質のビオチン化および、NR1サブユニットとの共免疫沈降実験から、BDNF刺激により発現誘導されたNR2Cサブユニットは、NMDA受容体複合体を形成し、細胞表面で発現していることが明らかとなった。この結果は、NR2Cサブユニットの発現誘導の生理的意義を示唆するものであると考えられる。また、Nuclear Run-on AssayによりNR2Cの発現誘導には転写活性化が必要であること、ERKサブタイプのドミナントネガティブを用いた遺伝子導入実験によりERK1/2シグナリングがNR2Cの発現誘導に関わることが明らかとなった。より生体内に近い条件である小脳スライス培養の系においても、分散培養の系と同様に、脱分極条件下でのカルシニューリンシグナリングによるNR2C発現の抑制が見られたことから、生後の小脳発達に伴うNR2Cの発現誘導の制御にBDNF-TrkB、カルシニューリンシグナリングが重要な役割を果たしていることが強く示唆される。このことは、in situ hybridization、イムノブロッティングにより、Trk欠損マウスの生後の小脳顆粒細胞においてNR2Cの発現がmRNA、タンパク質レベルで顕著に減少していることが観察されたことからも裏付けられた。現在これまでの結果を合わせて論文にまとめ、投稿中である。

This year's primary culture of brain-derived neurotrophic granulosa cells was stimulated by brain-derived neurotrophic (BDNF) (50ng/ml) 96 time)による、TrkB-ERKシグナリングを开した、N-metyl-D-aspartate (NMDA) Receptor NR2C Suppressantリンジグナリングによるそのcontrolled について, さらなるanalytic を行った. Cell surface polypeptide, NR1 protein, co-immunoprecipitation, BDNF stimulation, and BDNF stimulation. It leads to the formation of NR2C and NMDA receptor complex, and the appearance of cell surface. The result of the test and the physiological significance of the induction of NR2C are shown in the test.また、Nuclear Run-on AssayによりNR2Cの発成には転WRITE ACTIVATION NECESSARYであること、ERKサブタイプのドミナントネガティブを Use the いた弝子 to import the 実験によりERK1/2シグナリングがNR2Cの発成に关わることが明らかとなった. The system of より生 in vivo near-condition である小脳スライス culture, the system of dispersed culture と同様に、Under the condition of depolarization, it is possible to suppress the appearance of NR2C under the conditions of depolarization. BDNF-TrkB , カルシニューリンシグナリングがimportant なservice cut をfruit たしていることがstrong くshows 唆される.このことは、in situ hybridization, イムノブロッティングにより, Trk deficiency マウスの生后の小脳 granulosa cells においてNR2C's mRNA, タンパク性レベルで顕与にREDuces していることが観看されたことからも里发けられた. The result of the current research is that the paper is combined and the paper is being submitted.