ヘルペスウイルスをベクターとしたイヌバベシアギブソニー原虫感染症のワクチン開発

以疱疹病毒为载体研制犬原虫感染疫苗

• 批准号: 02J02555
• 负责人: 福本 晋也
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J02555/
• 关键词: Babesia gibsoni; ワクチン; P50; イヌヘルペスウイルス; バベシアギブソニー; ヘルペスウイルスベクター

イヌバベシアギブソニー原虫感染症に対するワクチン開発にあたり、年次計画に基づき以下の研究を行った。1 イヌサイトカイン遺伝子のクローニング原虫感染防御に重要とされている細胞性免疫を刺激するインターフェロンγ、IL-12、IL-18遺伝子をイヌ胸腺細胞よりmRNAを抽出しRT-PCR法によりクローニングした。また、その塩基配列の解析も行った。2 組換えウイルスの作出とそのin vitroにおける性状解析組換えP50蛋白に対する抗血清を作製し、Babesia gibsoni感染イヌ赤血球置換SCIDマウスに投与することにより原虫増殖抑制効果を検証した。その結果、対照群と比較し有意に原虫の増殖を抑制した。この結果を踏まえ、P50を導入した組換えイヌヘルペスウイルスを作製した。さらに、他の抗原遺伝子P29及びP130の同定に成功し、これらの遺伝子を導入した組換えヘルペスウイルスを作製した。目的遺伝子の導入をサザンブロット法により確認した。これらのウイルスの増殖能をin vitroで解析した結果、親ウイルスと比較し有意な差は認められなかった。また、in vitroで組換えヘルペスウイルスによる導入遺伝子の発現を、ノーザンブロット法、間接蛍光抗体法及びウエスタンブロット法で確認した。さらに発現産物をマウスに免疫、抗血清を作製しB.gibsoni原虫に対する反応性を間接蛍光抗体法により確認したところ、高い反応性を示した。このことから組換えヘルペスウイルスにより発現された各遺伝子産物は、天然型のものに非常に近い構造を持つことが確認された。また各サイトカイン遺伝子導入した組換えヘルペスウイルスを作製し、同様の解析を行い、発現を確認した。現在これらの組換えヘルペスウイルスを用いた、イヌにおける感染防御効果評価実験の準備中である。

イ ヌ バ ベ シ ア ギ ブ ソ ニ ー parasite adapting just-in-time inventory に す seaborne る ワ ク チ ン open 発 に あ た り, years time plan に づ き following の を line っ た. 1 イ ヌ サ イ ト カ イ ン posthumous son 伝 の ク ロ ー ニ ン グ parasite infection defense に important と さ れ て い る cell immunity を stimulus す る イ ン タ ー フ ェ ロ ン gamma, IL - 12, IL - 18 heritage 伝 son を イ ヌ thymocyte よ り mRNA を spare し rt-pcr method に よ り ク ロ ー ニ ン グ し た. Youdaoplaceholder0, そ <s:1> the base is arranged in a <s:1> resolution of the った row った. Two groups in え ウ イ ル ス の make と そ の in vitro に お け る traits parsing protein group in え P50 に す seaborne る antiserum を as し, Babesia gibsoni infection イ ヌ red blood cell replacement SCID マ ウ ス に cast with す る こ と に よ り parasite raised colonization inhibition of unseen fruit を 検 card し た. The そ そ results showed that compared with the と of the population, the <s:1> was more inclined to に protozoan <s:1> proliferation を and inhibited <s:1> た. Tread こ の results を ま え, P50 を import し た group in え イ ヌ ヘ ル ペ ス ウ イ ル ス を cropping し た. さ ら に, he survived 伝 の antigen P29 and び P130 の with に し success, こ れ ら の posthumous son 伝 を import し た group in え ヘ ル ペ ス ウ イ ル ス を cropping し た. The objective is to import the 伝 sub-batch into the をサザ ブロット ブロット ブロット method によ and によ to confirm the た. こ れ ら の ウ イ ル ス の rights can yield を in vitro analytical し で た results, ウ イ ル ス と compare し intentionally な poor は recognize め ら れ な か っ た. ま た, the in vitro で group in え ヘ ル ペ ス ウ イ ル ス に よ る import legacy 伝 son の 発 を, ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト method, indirect light 蛍 antibody method and び ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト method で confirm し た. さ ら に 発 now product を マ ウ ス に immunity, antiserum を cropping し B.g ibsoni parasite に す seaborne る anti 応 を 蛍 light antibody indirect method に よ り confirm し た と こ ろ, high い anti 応 を shown し た. こ の こ と か ら group in え ヘ ル ペ ス ウ イ ル ス に よ り 発 now さ れ た the heritage of the latter's 伝 は, natural type の も の に very nearly い に tectonic を hold つ こ と が confirm さ れ た. ま た each サ イ ト カ イ ン heritage 伝 son import し た group in え ヘ ル ペ ス ウ イ ル ス し, with others in the を cropping の parsing を い, 発 を now confirmed し た. Currently, the <s:1> れら group is being replaced with えヘ えヘ ペスウ ペスウ スを スを スを for the evaluation of the effect of the prevention and control of infection in <s:1> た and ヌにおける ヌにおける. The laboratory is being prepared である.

项目成果

Fukumoto, S.et al.: "Molecular characterization of a gene encoding a 29-kDa cytoplasmic protein of Babesia gibsoni and evaluation of its diagnostic potentiality"Molecular and Biochemical Parasitology. 131・2. 129-136 (2003)

Fukumoto, S. 等人：“吉布氏巴贝虫 29-kDa 细胞质蛋白基因的分子特征及其诊断潜力的评估”《分子和生物化学寄生虫学》131·2（2003 年）。

Fukumoto, S.et al.: "High-level expression of truncated surface antigen P50 of Babesia gibsoni in insect cells by baculovirus and evaluation of its immunogenicity and antigenicity"Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 10・4. 596-601 (2003)

Fukumoto，S.等人：“杆状病毒在昆虫细胞中高水平表达吉氏巴贝虫表面抗原P50及其免疫原性和抗原性的评估”临床和诊断实验室免疫学10・4。

Huang X, Xuan X, Kimbita EN, Battur B, Miyazawa T, Fukumoto S, et al.: "Development and evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay with recombinant SAG2 for diagnosis of Toxoplasma gondii infection in cats"Journal of Parasitology. 88・4. 804-807 (2

黄轩・4.804-807 (2

Fukumoto, S.et al.: "Inhibitory effect of antiserum to surface antigen P50 of Babesia gibsonion growth of parasite in severe combined immunodeficiency mice given canine red blood cells"Infection and Immunity. 72・3(In press). (2004)

Fukumoto, S.et al.：“给予犬红细胞的严重联合免疫缺陷小鼠体内巴贝虫表面抗原 P50 寄生虫生长的抑制作用”感染与免疫（2004 年）。

Fukumoto, S.et al.: "Serodiagnosis of canine Babesia gibsoni infection by enzyme-linked immunosorbent assay with recombinant P50 expressed in Escherichia coli"Journal of Parasitology. 901・2(In press). (2004)

Fukumoto, S.等人：“利用大肠杆菌表达的重组P50进行酶联免疫吸附测定犬吉布氏巴贝虫感染的血清诊断”Journal of Parasitology 901·2（出版中）。