生体内におけるToll-like receptorの役割の解析

Toll样受体体内作用分析

• 批准号: 02J04856
• 负责人: 邊見 弘明
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J04856/
• 关键词: Toll-like receptor; 繊維芽細胞; リポポリサッカライド; 二本鎖RNA; ウイルス; IFN-β; CpG DNA; Toll-like receptor 9; MyD88; 樹状細胞サブセット; IFN-α; IL-12

本年度は、TLR3やTLR4のシグナル伝達分子の一つとして報告されているI-κB kinase (IKK)関連分子であるIKK-iやTBK1それぞれの遺伝子欠損マウスの解析を行った。TBK1欠損マウスは致死であるため、胎仔より繊維芽細胞(EF)を調整し実験を行った。IKK-i欠損またはTBK1欠損細胞は、ともにTNF-αやIL-1β,TLR4リガンドであるリポポリサッカライド(LSP)やTLR2リガンドである細菌由来リポペプチドに反応して正常細胞と同程度のIL-6の産生を認めた。さらに、LPS刺激によるIFN-βやIFN誘導性遺伝子であるISG54やIP-10などの遺伝子発現を検討したところ、TBK1欠損細胞でのみこれら遺伝子の発現が減少していた。さらに、これらEFを二本鎖RNAのアナログであるpoly(I:C)で刺激したところ、IKK-i欠損細胞は正常細胞と同様な反応を示すが、TBK1欠損細胞でIFN-βやIFN誘導性遺伝子の発現誘導が障害されていた。さらに、IKK-i/TBK1両遺伝子欠損細胞は、poly(I:C)によるIFN-β誘導が完全に消失し、IKK-iもpoly(I:C)刺激において、IFN-βの産生誘導に関与していることが判明した。また、これらIFN-βやIFN誘導性遺伝子の発現に関与している転写因子IRF-3の活性化がTBK1欠損細胞では障害されていた。さらには、センダイウイルスなどによるこれらIFN-βやIFN誘導性遺伝子の誘導もTBK1欠損細胞で障害され、TBK1がTLR4やウイルス感染によるIFN-βやIFN誘導性遺伝子の発現誘導に重要な役割を担っていることが判明した。この研究成果は、現在投稿中である。このほか、TLRファミリー分のアダプター分子の機能解析や、TLR7やTLR8のリガンドの探索にも参画した。

This year は, TLR3 や TLR4 の シ グ ナ ル 伝 molecules of の つ と し て report さ れ て い る I - kappa B predominate kinase (IKK) masato even molecular で あ る IKK -i や TBK1 そ れ ぞ れ の heritage 伝 son owe loss マ ウ ス の parsing line を っ た. TBK1 underdamage ウス ウス death であるため, fetal よ <s:1> 繊 germ cell (EF)を adjustment experiment を row った. IKK - I owe loss ま た は TBK1 owe は damaged cells, と も に TNF alpha beta や IL - 1, TLR4 リ ガ ン ド で あ る リ ポ ポ リ サ ッ カ ラ イ ド (LSP) や TLR2 リ ガ ン ド で あ る bacterial origin リ ポ ペ プ チ ド に anti 応 し て と normal cells with degree の IL - 6 の produce を recognize め た. さ ら に, LPS stimulation に よ る IFN - beta や IFN induced posthumous son 伝 で あ る ISG54 や IP - 10 な ど の heritage 伝 発 を now son beg し 検 た と こ ろ, TBK1 owe damage cells で の み こ れ ら posthumous son 伝 の 発 が now reduce し て い た. さ ら に, こ れ ら EF を 2 lock RNA の ア ナ ロ グ で あ る poly real (I: C) で stimulus し た と こ ろ, IKK - I owe damaged cells は normal と with others な anti 応 を shown す が, TBK1 owe damage cells で IFN - beta や IFN induced heritage 伝 son の 発 now induced が handicap of さ れ て い た. さ ら に, IKK - I/TBK1 struck heritage 伝 owe は damaged cells, poly real (I: C) に よ る IFN - induced が に completely disappear し beta, IKK -i も poly real (I: C) stimulation に お い て, IFN - beta の produce induced に masato and し て い る こ と が.at し た. ま た, こ れ ら IFN - beta や IFN induced posthumous son 伝 の 発 now に masato and し て い る planning write factor IRF - 3 の activeness が TBK1 owe damaged cells で は handicap of さ れ て い た. さ ら に は, セ ン ダ イ ウ イ ル ス な ど に よ る こ れ ら IFN - beta や IFN induced posthumous son 伝 の induced も TBK1 owe で handicap of damaged cells さ れ, TBK1 が TLR4 や ウ イ ル ス infection に よ る IFN - beta や IFN induced heritage 伝 son の 発 induced に important cut を な service now bear っ て い る こ と が.at し た. The research results of are currently under submission at である. こ の ほ か, TLR フ ァ ミ リ ー points の ア ダ プ タ ー molecular の functional analytic や, TLR7 や TLR8 の リ ガ ン ド の explore に も ginseng draw し た.

项目成果

Hiroaki Hemmi et al.: "The Roles of Toll-Like Receptor 9, MyD88, and DNA-Dependent Protein Kinase Catalytic Subunit in the Effects of Two Distinct CpG DNAs on Dendritic Cell Subsets"The Journal of Immunology. 170. 3059-3064 (2003)

Hiroaki Hemmi 等人：“Toll 样受体 9、MyD88 和 DNA 依赖性蛋白激酶催化亚基在两种不同 CpG DNA 对树突状细胞亚群的影响中的作用”免疫学杂志。

Florian Heil et al.: "Species-Specific Recognition of Single-Stranded RNA via Toll-like Receptor 7 and 8"Science. 303. 1526-1529 (2004)

Florian Heil 等人：“通过 Toll 样受体 7 和 8 对单链 RNA 进行物种特异性识别”科学。

Sandra S.Diebold et al.: "Innate Antiviral Responses by Means of TLR7-Mediated Recognition of Single-Stranded RNA."Science. 303. 1529-1531 (2004)

Sandra S.Diebold 等人：“通过 TLR7 介导的单链 RNA 识别实现先天抗病毒反应”。《科学》。

Masahiro Yamamoto et al.: "Essential role for TIRAP in activation of the signalling cascade shared by TLR2 and TLR4"nature. 420. 324-329 (2002)

Masahiro Yamamoto 等人：“TIRAP 在 TLR2 和 TLR4 共享的信号级联激活中的重要作用”性质。

Masahiro Yamamoto et al.: "TRAM is specifically involved in the Toll-like receptor 4-mediated MyD88-independent signaling pathway."Nature Immunology. 4. 1144-1150 (2003)

Masahiro Yamamoto 等人：“TRAM 特别参与 Toll 样受体 4 介导的 MyD88 独立信号通路。”《自然免疫学》。