权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

RNAヘリカーゼを付加したリボザイムの高機能化

添加 RNA 解旋酶的高功能性核酶

基本信息

批准号：
02J08116
负责人：
加藤義雄
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J08116/
关键词：
機能性RNA リボザイム siRNA ダンベル型DNA RNAヘリカーゼ遺伝子スクリーニング tRNA 輸送

项目摘要

本研究は、リボザイム等の機能性RNAを利用した遺伝子特異的な発現抑制の手法開発を通し、遺伝子の機能を探索することを目的としている。mRNAを標的とした機能性RNAは、塩基対形成を通じて標的と結合するため、非常に特異的な分子認識能を有しており、機能未知遺伝子の機能解析や、癌やウイルス等の疾患原因遺伝子を標的とした遺伝子治療への応用が期待されている。近年、遺伝子発現を特異的に抑制することができる機能性RNAとして、siRNAが報告されている。siRNAとは、20塩基対程度の短鎖二本鎖RNAであり、このsiRNAを細胞内に導入することによって遺伝子発現を特異的に抑制することが可能である。申請者は、siRNAを細胞内で発現し、継続的に遺伝子発現の抑制効果が得られるようなsiRNA発現系を新たに構築した。この新規siRNA発現システムには、4個の自己切断型リボザイムが含まれており、4箇所で切断を起こすことによって、siRNAを生じさせるシステムである。このシステムのメリットは、siRNAを様々なプロモーター系で利用できる点、任意の配列をsiRNAとして生じさせることができる点であり、非常にフレキシブルな分子設計が可能となる。一方、このような機能性RNA発現システムを細胞内に導入する際に問題となるのは、導入すべきベクターとしてのDNAの形状である。通常プラスミドが利用されているが、このベクター系としては、より小さく、安定なものが求められる。この条件に該当するものとして閉環末端線状DNA(ダンベル型DNA)が挙げられるが、従来、構築するのが困難だったために汎用性が低かった。そこで、申請者は、新規ダンベル型DNAの作成法を考案し、簡便かつ効率的に、細胞内で安定な、siRNA発現ベクターシステムを構築することに成功した。

The purpose of this study is to explore the use of functional RNA, such as RNA, RNA, mRNA targets functional RNA, RNA base pairs, target binding, very specific molecular recognition, functional analysis of genes with unknown functions, cancer, and other disease causes, gene targets, and gene therapy are expected. In recent years, gene expression has been specifically inhibited by functional RNA and siRNA. siRNA is introduced into cells at a 20-base level and can specifically inhibit gene expression. The applicant constructed a novel siRNA development system to inhibit the development of siRNA in cells. The new siRNA generation system includes four self-cutting siRNA generation systems, four self-cutting siRNA generation systems and four self-cutting siRNA generation systems. The functionality of this system is similar to the fact that siRNA can be used in a variety of ways, and any siRNA sequence can be generated, making very clear molecular design possible. A functional RNA is produced when it is introduced into cells. Usually, the price of goods is low, and the price of goods is low. The condition of the closed loop terminal linear DNA(DNA-DNA) is very difficult to construct. The applicant has successfully developed a new method for the preparation of recombinant DNA, a simple and efficient method for intracellular stability and siRNA generation.