RNAヘリカーゼを付加したリボザイムの高機能化

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本研究は、リボザイム等の機能性RNAを利用した遺伝子特異的な発現抑制の手法開発を通し、遺伝子の機能を探索することを目的としている。mRNAを標的とした機能性RNAは、塩基対形成を通じて標的と結合するため、非常に特異的な分子認識能を有しており、機能未知遺伝子の機能解析や、癌やウイルス等の疾患原因遺伝子を標的とした遺伝子治療への応用が期待されている。近年、遺伝子発現を特異的に抑制することができる機能性RNAとして、siRNAが報告されている。siRNAとは、20塩基対程度の短鎖二本鎖RNAであり、このsiRNAを細胞内に導入することによって遺伝子発現を特異的に抑制することが可能である。申請者は、siRNAを細胞内で発現し、継続的に遺伝子発現の抑制効果が得られるようなsiRNA発現系を新たに構築した。この新規siRNA発現システムには、4個の自己切断型リボザイムが含まれており、4箇所で切断を起こすことによって、siRNAを生じさせるシステムである。このシステムのメリットは、siRNAを様々なプロモーター系で利用できる点、任意の配列をsiRNAとして生じさせることができる点であり、非常にフレキシブルな分子設計が可能となる。一方、このような機能性RNA発現システムを細胞内に導入する際に問題となるのは、導入すべきベクターとしてのDNAの形状である。通常プラスミドが利用されているが、このベクター系としては、より小さく、安定なものが求められる。この条件に該当するものとして閉環末端線状DNA(ダンベル型DNA)が挙げられるが、従来、構築するのが困難だったために汎用性が低かった。そこで、申請者は、新規ダンベル型DNAの作成法を考案し、簡便かつ効率的に、細胞内で安定な、siRNA発現ベクターシステムを構築することに成功した。