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マウス概日時計発振系における転写因子BMAL分子群の協調作用メカニズム

转录因子BMAL分子在小鼠生物钟振荡系统中协同作用的机制

基本信息

批准号：
02J08002
负责人：
佐々木桃子
金额：
$ 1.6万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

交付申請書に記載した研究目的・実施計画に沿って研究を進め、下記の成果を得た。【1】マウスBMAL分子群の転写活性化能の解析転写因子としてのmBMAL1とmBMAL2の機能を比較するために、まず、マウスBMAL2の全長をクローニングし、真核細胞発現用のコンストラクトを作製した。これらのコンストラクトを用いて培養細胞中にBMAL分子を発現させたところ、いずれのBMAL分子も単独発現に比べCLOCKとの共発現により発現量が増加した。この結果から、BMAL分子はCLOCKと相互作用することにより自らの安定性を調節している可能性が考えられた。ルシフェラーゼアッセイにより転写活性化能を調べたところ、mBMAL1に加えてmBMAL2もCLOCKと共にmPer1上流配列を介して転写を活性化する能力をもつことがわかった。このことから、mBMAL2が時計発振の中核を担う転写調節に寄与する可能性が考えられる。【2】マウスBMAL分子群の発現様式の解析mBMAL1,mBMAL2,およびそれぞれのスプライスバリアントが協調的に遺伝子発現を制御する可能性を検証するために、初年度に作製した抗BMAL2抗体を用い、マウス脳ホモジェネイトに対するウエスタンブロット解析を行った。その結果、視床下部をはじめ脳の各領域において、培養細胞中で発現させたmBMAL2a(およそ70kDa)よりも易動度の小さい陽性バンドが検出できた。このバンドは、抗原部位の異なる2種類の抗BMAL2抗体によって検出できたことから、生体内のmBMAL2由来の分子であると考えられた。この分子の見かけの分子量はmBMAL2aの計算分子量とは異なることから、 mBMAL2aが翻訳後修飾された分子である可能性、あるいはmBMAL2の新規のバリアントであると推定される。

Submit the application document to record the research objectives, implement the plan, progress the research, and record the results. [1] Analysis of the activation energy of the BMAL molecular group and comparison of the functions of mBMAL1 and mBMAL 2. The expression of BMAL molecules in cultured cells was increased compared with the co-expression of CLOCK. The result is that BMAL molecules interact with CLOCK molecules to regulate their stability. The ability to activate the mBMAL1 is adjusted by adding the mBMAL2 CLOCK to the mPer1 upstream configuration. The possibility of the clock oscillation and the write adjustment of mBMAL2 is examined. [2] Analysis of the expression of the BMAL molecular group mBMAL1,mBMAL2,mBMAL2, mBMAL 1, mBMAL 2, mB As a result, mBMAL2a(70kDa) was detected in cultured cells, and a small number of positive cells were detected in the lower part of the retina. Two types of anti-BMAL 2 antibodies have been identified, including those with different antigenic sites, and those with mBMAL2 origin in vivo. The apparent molecular weight of this molecule is different from the calculated molecular weight of mBMAL2a. There is a possibility that mBMAL2a may be modified after inversion, and there is a presumption that mBMAL2 will be newly regulated.