細胞内プロテアーゼの新しい物質認識機構に関与するポリリン酸の細胞機能解明

阐明多磷酸盐参与细胞内蛋白酶新物质识别机制的细胞功能

• 批准号: 02J09763
• 负责人: 野村 和孝
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J09763/
• 关键词: ポリリン酸; Lonプロテアーゼ; 細胞内局在; Fis; DNA結合タンパク質; リボソームタンパク質

昨年度、LonのDNAおよびポリリン酸結合性についてin vitroで詳細に解析を行った。その結果から、通常Lonは細胞内でDNAの集合体である核様体に存在しており、アミノ酸飢餓で蓄積したポリリン酸によりLonは核様体から遊離し、複合体として新たな活性を持つようになるというモデルが考えられた。そこで本年度は、このモデルが細胞内で正しいことを確かめるために、LonのGFP(緑色蛍光タンパク質)融合タンパク質を用いて細胞内局在の解析を行った。ポリリン酸を蓄積しない栄養条件ではLon-GFPは染色体DNAの集合体である核様体に局在した。一方、アミノ酸飢餓ではLon-GFPは核様体から遊離し、ポリリン酸-Lon-GFP複合体の粒子として確認できた。この結果から、Lonの局在がポリリン酸により変化するというモデルが細胞内において正しいことが示された。ポリリン酸と結合するタンパク質はin vitroにおいて数多く見つかっており、その中にはDNA結合タンパク質が含まれている。そこで、Lonと同様な局在の変化を示すDNA結合タンパク質を探索した。その結果、核様体を構成する主要なタンパク質の一つであり、グローバルな転写に関わるFisを発見した。また、in vitroにおいてFigはLonによりポリリン酸依存的に分解されることを見いだした。さらに、DNAが存在してもポリリン酸依存的に分解されることを示した。これらの結果は、Lonとポリリン酸による新規の転写調節機構の存在を示唆している。今後、細胞内におけるFisの分解や転写への影響についてさらに詳細な解析が必要であると考えられる。

Last year, in vitro data was analyzed in accordance with the requirements of the database. The results showed that in general, the intracellular DNA aggregates and nucleosomes of Lon were isolated, the nucleosomes were isolated from Lon cells, and the complex was isolated from the nucleosomes. This year, we need to make sure that the data of the current year and the integration of the LonWorks GFP (color, light and light) are in place. Lon-GFP chromosomes DNA aggregates nucleosomes and nucleosomes are in place. On the other hand, the Lon-GFP nuclear body is isolated, the acid-Lon-GFP complex is particle, and the particle is confirmed. The results showed that the Longhouse Bureau showed that there was a significant increase in the number of cells in the cell. In this case, the number of in vitro errors is high, and the number of errors is very high. In the middle of the test, the DNA is combined with each other, and there is no error. Both Lon and DNA will be displayed in the company to explore the situation. The results show that the nuclear system is the most important part of the system. One of the most important things is to write down the results of the Fis report. In vitro, in vitro, Fig, Lon, acid-dependent decomposition, acid-dependent decomposition and acid-dependent decomposition. There is an acid-dependent decomposition of acid-dependent compounds in DNA. The results show that there is an indication that there is an abetting error in the new rules and regulations writing mechanism of Lon. From now on, you will need to analyze the necessary information in the Fis.

项目成果

Lonによるリボソーム蛋白質のリサイクリングシステム

基于Lon的核糖体蛋白回收系统

• 发表时间: 2004
• 期刊: 蛋白質核酸酵素 49
• 作者: Kazutaka Nomura;野村 和孝
• 通讯作者: 野村 和孝

黒田章夫, 野村和孝, 大竹久夫: "蘇るか分子化石-長鎖ポリリン酸による蛋白質分解酵素の活性調節"蛋白質核酸酵素. Vol47 No.7. 801-807 (2002)

Akio Kuroda、Kazutaka Nomura、Hisao Otake：“分子化石的复活 - 长链聚磷酸对蛋白水解酶活性的调节”《蛋白质核酸酶》第 47 卷第 801-807 期（2002 年）。

Effects of inorganic polyphosphate on the proteolytic and DNA-binding activities of Lon in Escherichia coli

• DOI: 10.1074/jbc.m404725200
• 发表时间: 2004-08-13
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Nomura, K;Kato, J;Kuroda, A
• 通讯作者: Kuroda, A