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カイコの胚子活性化に関与するRNAヘリケース様遺伝子の時期特異的発現制御の解明

阐明参与蚕胚胎激活的RNA解旋酶样基因的阶段特异性表达调控

基本信息

批准号：
13760044
负责人：
澤田博司
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760044/
关键词：
休眠非休眠胚子カイコ RNAヘリケース DEAD box ディファレンシャル・ディスプレー法リコンビナント・タンパク質 DEAD DEHD box セリン・リッチ・領域ディファレンシャル・ディスプレー

项目摘要

本年度は,RT-PCRによるディファレンシャル・ディスプレー法を用いて単離した,カイコの胚子活性化に関与すると考えられる遺伝子断片(RNA helicase like ; RHL)の完全長cDNAをRACE法にて単離する事に成功した。そのcDNAは約2.7k bpあり,593アミノ酸に相当するORFが含まれていた。開始Metの直前には典型的なコサック・コンセンサス配列があり,3'UTRにはポリA付加シグナルの他RNAの分解に関与していると考えられているATTTA motifが認められた。予想されるアミノ酸配列中には,DEAD box RNA helicase motif, Serine rich regionや数種のキナーゼによるリン酸化サイトなどが認められた。このRHLは,今のところDEAD box RNAヘリケースファミリーに分類されると思われるが,他の生物種との比較からホモロジーは低く,カイコに限らず新規なものであった。また,機能解析の第一歩として,この新規RHLのORFを含む約1.8k bpのcDNAをヒスチジン・タグ付きのタンパク質発現用ベクターに組込み大腸菌内での発現を試みた。その結果,ORFから予想される約6.8k Daの目的のタンパク質(rRHL)の発現が認められた。引き続き,ニッケルキレートカラムにてそのタンパク質を精製し,ポリクローナル抗体の作製を試みたところ,抗原に用いたrRHLを認識する抗血清を得る事に成功した。胚子発生初期におけるRHL mRNAの発現状況は,詳細な解析が既に完了し昨年の研究実績報告書に記載済みである。現在,RHL mRNAの発現解析と同時期のRHLの変動を,イムノブロット法を用いて解析中である。

This year,RT-PCR was successfully used to isolate RNA helicase like (RHL) cDNA fragments from embryos. The cDNA sequence is approximately 2.7 bp long and contains 593 amino acids corresponding to the ORF. Start with the typical Met motif. 3 'UTR motif. In order to achieve this goal,DEAD box RNA helicase motif, Serine rich region, and several kinds of RNA helicase motif were identified. This RHL is now the first DEAD box RNA to be classified into three categories, and its biological species are compared to the first category. In the first step of functional analysis, the ORF of RHL contains a cDNA fragment of about 1.8 kb. As a result, the ORF is expected to be about 6.8k Da, and the target RHL is expected to appear. The antiserum was successfully obtained by the method of purification and purification of antiserum. The expression of RHL mRNA during the early embryo development was analyzed in detail. Now, the expression of RHL mRNA and the change of RHL in the same period are analyzed by using the method of translation.