腸管での抗原提示に関与するマウス小腸上皮細胞株の樹立

参与肠道抗原呈递的小鼠小肠上皮细胞系的建立

• 批准号: 13760095
• 负责人: 山田 潔
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760095/
• 关键词: 小腸上皮細胞; 抗原提示; 腸管免疫; 小腸上皮内リンパ球; 細胞株; 初代培養細胞; 微生物由来物質; β-カテニン

本研究により、胎仔BALB/cマウスから小腸上皮細胞(IEC)を初代培養する方法を確立した。この方法は、EDTA溶液により処理を行った胎仔小腸組織片より増殖してくるIECを培養するもので、胎生15および16日目の胎仔小腸組織片からの上皮細胞の増殖が最も良好であった。次に、IECの増殖活性を亢進することが期待される活性化型β-カテニン遺伝子を、ヒト伸長因子1αサブユニットのプロモーター下流に挿入した発現ベクターを構築した。リポフェクション法およびエレクトポレーション法を用いて胎仔由来初代培養IECへの活性化型β-カテニン遺伝子の導入を試みたが、細胞増殖活性を維持したクローンの単離には至らず、細胞株を得ることは出来なかった。現在、SV40ウイルス由来のラージT抗原遺伝子の導入実験を行っている。一方、得られたマウス胎仔由来初代培養IECにおける免疫担当細胞としての特性についても解析を行った。培養開始2週間後、初代培養IECにおいて成熟マーカーと考えられるアルカリフォスファターゼ活性とMHCクラスII分子の発現が認められた。このMHCクラスII分子の発現は、培地中へのインターフェロンγの添加によって強く増強された。さらに、卵白アルブミン(OVA)特異的T細胞レセプターを発現するトランスジェニックマウスから精製した脾臓および小腸上皮内リンパ球由来CD4陽性T細胞に対し、抗原提示能を有することが明らかとなった。一方、初代培養IECの共存により、通常の脾臓CD4陽性T細胞の抗原特異的な増殖が抑制されることも示した。また、腸管免疫系に重要な影響を与えることが示唆されている微生物に対するIECの応答についても析を行った結果、初代培養IECが微生物由来物質を認識する受容体を発現していること、大腸菌およびリポ多糖に応答して、様々なサイトカイン遺伝子の発現が上昇することを明らかにした。

In this study, the method of primary culture of fetal BALB/c cells was established. This method was used to treat fetal small intestine tissue sections with EDTA solution. The growth of epithelial cells in fetal small intestine tissue sections from 15 to 16 days after birth was the best. In addition, IEC's proliferation activity is enhanced, and it is expected that the activated β-protein gene will be constructed by the elongation factor of 1α-protein. The introduction of activated β-protein from primary culture of fetal embryos was tested, and the cell proliferation activity was maintained. Now, SV40 is the origin of T antigen gene introduction process. The origin of the fetus was determined by the analysis of the characteristics of the immune-responsible cells in primary culture. Two weeks after the start of culture, the primary culture IEC matured and the MHC II molecules were identified. The development of MHC II molecules in the culture medium is enhanced by the addition of MHC II molecules. In addition, OVA specific T cells are expressed in the small intestine epithelium and derived from CD4 positive T cells, indicating that antigen can be detected in these cells. The proliferation of CD4-positive T cells in primary culture was inhibited. In addition, the important influence of intestinal immune system on the development of microbial-derived substances in primary culture of IEC was studied. The development of microbial-derived substances in primary culture of IEC was studied.

项目成果

村上 龍二: "Nucleotides enhance the secretion of interleukin 7 from primary-cultured murine intestinal epithelial cells"Cytotechnology. (印刷中).

Ryuji Murakami：“核苷酸增强原代培养的小鼠肠上皮细胞中白细胞介素 7 的分泌”细胞技术（正在出版）。

上野川修一: "食品とからだ 免疫・アレルギーのしくみ"朝倉書店. 216 (2003)

上野川秀一：“食物与身体：免疫和过敏的机制”朝仓书店216（2003）。