腸管での抗原提示に関与するマウス小腸上皮細胞株の樹立

参与肠道抗原呈递的小鼠小肠上皮细胞系的建立

• 批准号: 13760095
• 负责人: 山田 潔
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760095/
• 关键词: 小腸上皮細胞; 抗原提示; 腸管免疫; 小腸上皮内リンパ球; 細胞株; 初代培養細胞; 微生物由来物質; β-カテニン

本研究により、胎仔BALB/cマウスから小腸上皮細胞(IEC)を初代培養する方法を確立した。この方法は、EDTA溶液により処理を行った胎仔小腸組織片より増殖してくるIECを培養するもので、胎生15および16日目の胎仔小腸組織片からの上皮細胞の増殖が最も良好であった。次に、IECの増殖活性を亢進することが期待される活性化型β-カテニン遺伝子を、ヒト伸長因子1αサブユニットのプロモーター下流に挿入した発現ベクターを構築した。リポフェクション法およびエレクトポレーション法を用いて胎仔由来初代培養IECへの活性化型β-カテニン遺伝子の導入を試みたが、細胞増殖活性を維持したクローンの単離には至らず、細胞株を得ることは出来なかった。現在、SV40ウイルス由来のラージT抗原遺伝子の導入実験を行っている。一方、得られたマウス胎仔由来初代培養IECにおける免疫担当細胞としての特性についても解析を行った。培養開始2週間後、初代培養IECにおいて成熟マーカーと考えられるアルカリフォスファターゼ活性とMHCクラスII分子の発現が認められた。このMHCクラスII分子の発現は、培地中へのインターフェロンγの添加によって強く増強された。さらに、卵白アルブミン(OVA)特異的T細胞レセプターを発現するトランスジェニックマウスから精製した脾臓および小腸上皮内リンパ球由来CD4陽性T細胞に対し、抗原提示能を有することが明らかとなった。一方、初代培養IECの共存により、通常の脾臓CD4陽性T細胞の抗原特異的な増殖が抑制されることも示した。また、腸管免疫系に重要な影響を与えることが示唆されている微生物に対するIECの応答についても析を行った結果、初代培養IECが微生物由来物質を認識する受容体を発現していること、大腸菌およびリポ多糖に応答して、様々なサイトカイン遺伝子の発現が上昇することを明らかにした。

In this study, によ によ, fetal BALB/c た ウス ら ら small intestinal epithelial cells (IEC)を primary culture する method を established た. こ の way は, EDTA solution に よ り 処 bedding line を っ た tire wang small intestine tissue slice よ り raised colonization し て く る IEC を cultivate す る も の で, viviparous 15 お よ び 16 mesh の tire wang small intestine tissue slice か ら の epithelial cells の raised colonization が も most good で あ っ た. に, IEC の raised colonization activities を hyperthyroidism す る こ と が expect さ れ る activation type beta カ テ ニ ン heritage 伝 を, ヒ ト elongation factor 1 alpha サ ブ ユ ニ ッ ト の プ ロ モ ー タ ー obscene に scions into し た 発 now ベ ク タ ー を build し た. リ ポ フ ェ ク シ ョ ン method お よ び エ レ ク ト ポ レ ー シ ョ を ン method with い て tire seed origin original training IEC へ の activation type beta カ テ ニ ン posthumous son 伝 の import を try み た が activity, cell rights colonization を maintain し た ク ロ ー ン の 単 from に は to ら ず, cell lines を る こ と は out な か っ た. Now, SV40ウ <s:1> ス ス ス is derived from <s:1> ラ ジ ジT antigen 伝 seed <e:1> and introduced into the を field って る る る. Side, and ら れ た マ ウ ス tire seed origin original training IEC に お け る bear immune cells と し て の features に つ い て も parsing line を っ た. Cultivation began two weeks later, early generation of IEC に お い て mature マ ー カ ー と exam え ら れ る ア ル カ リ フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ active と MHC ク ラ ス II molecules の 発 が now recognize め ら れ た. The ラスII molecules of <s:1> MHC are actively present, and the へ <s:1> へ <s:1> <s:1> <s:1> タ フェロ フェロ <s:1> γ <e:1> in the pedidium are added with によって strong く enhancement された. さ ら に, albumen ア ル ブ ミ ン (OVA) specific T cells レ セ プ タ ー を 発 now す る ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス か ら refined し た splenic お よ び intestinal intraepithelial リ ン パ ball origin positive CD4 T cells に し seaborne, antigen can prompt を す る こ と が Ming ら か と な っ た. One party, the original training IEC の coexistence に よ り, usually の splenic CD4 positive の antigen specific T cells な raised colonization が inhibit さ れ る こ と も shown し た. ま た, insufflate the immune system important な に influence を and え る こ と が in stopping さ れ て い る microbial に す seaborne る IEC の 応 answer に つ い て も analysis line を っ た results, original training IEC が microbial origin material を understanding す る by let body を 発 now し て い る こ と, coliform お よ び リ ポ polysaccharide に 応 answer し て, others 々 な サ イ ト カ イ ン heritage 伝 son の 発 が now Liter する に とを Ming ら に に た.

项目成果

村上 龍二: "Nucleotides enhance the secretion of interleukin 7 from primary-cultured murine intestinal epithelial cells"Cytotechnology. (印刷中).

Ryuji Murakami：“核苷酸增强原代培养的小鼠肠上皮细胞中白细胞介素 7 的分泌”细胞技术（正在出版）。

上野川修一: "食品とからだ 免疫・アレルギーのしくみ"朝倉書店. 216 (2003)

上野川秀一：“食物与身体：免疫和过敏的机制”朝仓书店216（2003）。