細菌由来物質がマウス小腸上皮細胞の抗原提示機能に及ぼす影響の解析

细菌来源物质对小鼠小肠上皮细胞抗原提呈功能的影响分析

• 批准号: 15780094
• 负责人: 山田 潔
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15780094/
• 关键词: 小腸上皮細胞; 初代培養細胞; 細胞株; 抗原提示; 腸管免疫; リポ多糖; ペプチドグリカン; T細胞; 細菌由来物質; 炎症性サイトカイン; ケモカイン; Toll様レセプター; サイトカイン

本研究では、小腸上皮細胞(IEC)による抗原特異的なT細胞の増殖応答の誘導および抑制について解析を行った。IECとしてマウス由来初代培養IECあるいは初代培養IECから樹立した細胞株を用いた。樹立したマウスIEC細胞株におけるMHCクラスII分子、CD80、CD86の恒常的な発現はほとんど認められなかった。一方、IFN-γ存在下で培養することによって、MHCクラスII分子の発現が強く認められたが、CD80、CD86の発現に顕著な変化は認められなかった。微生物由来物質であるリポ多糖(LPS)、ペプチドグリカン(PGN)による刺激によっても、これらの分子の発現に顕著な変化は認められなかった。卵白アルブミン(OVA)特異的なT細胞抗原レセプター遺伝子をもつトランスジェニックマウスの脾臓、腸間膜リンパ節由来T細胞の抗原特異的な増殖応答は、IFN-γ存在下で前培養したIEC細胞株によってのみ認められた。一方、粘膜固有層由来T細胞に対して、IFN-γ処理の有無に関わらずIEC細胞株は抗原特異的増殖応答を誘導した。小腸上皮内リンパ球から分離したCD4陽性T細胞に対しては、IEC細胞株あるいは脾臓細胞を抗原提示細胞とした場合のいずれにおいても、抗原特異的増殖応答は誘導されなかった。脾臓由来CD4陽性T細胞をIFN-γ処理IEC細胞株とOVAタンパクの共存下で培養した場合には、増殖応答の誘導は認められなかった。初代培養IECの培養上清の添加によって認められるT細胞の増殖抑制効果について、液性因子の同定を試みた結果、加熱耐性の低分子であることが示された。また、上清中にはプロスタグランジンE2(PGE2)が検出された。PGE2合成阻害剤であるインドメタシン存在下で培養した結果、IEC培養上清中のT細胞増殖に対する抑制効果が消失したことから、PGE2が主要な液性抑制因子であることが示唆された。

在这项研究中，我们分析了小肠上皮细胞（IEC）对抗原特异性T细胞增殖反应的诱导和抑制。从原发性培养的小鼠培养IEC或原代培养的IEC作为IEC中建立的细胞系。在已建立的小鼠IEC细胞系中，MHC II类分子，CD80和CD86的本构表达很少。另一方面，在IFN-γ存在下培养时，强烈观察到MHC II类分子的表达，但在CD80和CD86表达中未观察到显着变化。即使用微生物衍生物质脂多糖（LPS）和肽聚糖（PGN）刺激，这些分子的表达也没有明显的变化。 T细胞的抗原特异性增殖反应来自脾脏，携带卵巢蛋白（OVA）特异性T特异性T细胞抗原受体基因的转基因小鼠的肠系膜淋巴结，仅在IFN-γ存在下预培养的IEC细胞系仅观察到。另一方面，IEC细胞系会诱导抗原特异性的增生反应，对源自椎板层的T细胞的抗原特异性反应，而不管是否治疗了IFN-γ。对于在IEC细胞系或脾细胞为抗原细胞的情况下，未从上皮内淋巴细胞中分离的CD4阳性T细胞诱导抗原特异性增殖反应。当在IFN-γ处理的IEC细胞系和OVA蛋白的存在下培养脾脏的CD4阳性T细胞时，未观察到增殖反应。试图通过添加原代IEC的培养上清液观察到抑制T细胞生长的作用来识别体液因素，并且表明它是一种对热的小分子。此外，在上清液中检测到前列腺素E2（PGE2）。当在存在吲哚美辛（PGE2合成抑制剂）的存在下培养时，消除了T细胞生长在IEC培养上清液中的抑制作用，这表明PGE2是主要的体液抑制剂。

项目成果

特異抗原経口投与時における小腸上皮内リンパ球の遺伝子発現変化

口服特定抗原后小肠上皮内淋巴细胞基因表达的变化

• 发表时间: 2005
• 期刊: 臨床免疫 43・2
• 作者: 戸塚 護;山田 潔
• 通讯作者: 山田 潔