乳成分による制御性T細胞を介したがん免疫逃避機構の制御

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CD36を高発現したTregに及ぼすMFGMの効果を明らかにするため、培養により分化させた制御性T細胞（Treg）にメラノーマ細胞の培養上清を添加し、CD36発現が上昇するかどうか検討した。また、CD36を介した脂肪酸取込みがMFGMにより抑制されるかどうかを明らかにするため、蛍光（BODIPY）標識脂肪酸の細胞内への取り込みの評価方法を検討した。腫瘍モデル細胞として汎用されているメラノーマ細胞株B16を培養し、培養上清（CM）を回収した。Tregは、C57BL/6マウスの脾臓細胞から磁気ビーズ結合抗体を利用したMACS処理により精製したCD4 T細胞を、TGF-β存在下、CD3抗体/CD28抗体で5日間刺激培養することで得た。CMで48時間培養することによるTregにおけるCD36の発現上昇をフローサイトメトリーで解析した。コントロール培地で培養したTregと比べて、メラノーマ細胞のCMで培養したTregのMFI（平均蛍光強度）が上昇していることが認められた。この結果から、がん細胞培養上清でTregを培養することで、Tregの1細胞あたりのCD36発現が増加したことが確認できた。CD36を高発現するマクロファージ細胞株RAW264.7をBODIPY標識脂肪酸を含む培地あるいはPBSで処理後、蛍光顕微鏡あるいはフローサイトメトリーで解析した。その結果、培地よりもPBSでの処理のほうがBODIPY標識脂肪酸の取り込みが促進されることが蛍光顕微鏡あるいはフローサイトメトリーで確認された。また、消化酵素処理したMFGMを添加することにより、マクロファージへのBODIPY標識脂肪酸の取り込みが抑制されたが、消化酵素と処理時間および使用するMFGMの調製方法によって脂肪酸取り込み抑制効果に差が生じることが示唆された。