乳成分による制御性T細胞を介したがん免疫逃避機構の制御

牛奶成分通过调节性 T 细胞控制癌症免疫逃逸机制

• 批准号: 22K05522
• 负责人: 山田 潔
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Utsunomiya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05522/
• 关键词: 制御性T細胞; がん; 脂肪酸; 乳脂肪球皮膜; 抗腫瘍免疫

CD36を高発現したTregに及ぼすMFGMの効果を明らかにするため、培養により分化させた制御性T細胞（Treg）にメラノーマ細胞の培養上清を添加し、CD36発現が上昇するかどうか検討した。また、CD36を介した脂肪酸取込みがMFGMにより抑制されるかどうかを明らかにするため、蛍光（BODIPY）標識脂肪酸の細胞内への取り込みの評価方法を検討した。腫瘍モデル細胞として汎用されているメラノーマ細胞株B16を培養し、培養上清（CM）を回収した。Tregは、C57BL/6マウスの脾臓細胞から磁気ビーズ結合抗体を利用したMACS処理により精製したCD4 T細胞を、TGF-β存在下、CD3抗体/CD28抗体で5日間刺激培養することで得た。CMで48時間培養することによるTregにおけるCD36の発現上昇をフローサイトメトリーで解析した。コントロール培地で培養したTregと比べて、メラノーマ細胞のCMで培養したTregのMFI（平均蛍光強度）が上昇していることが認められた。この結果から、がん細胞培養上清でTregを培養することで、Tregの1細胞あたりのCD36発現が増加したことが確認できた。CD36を高発現するマクロファージ細胞株RAW264.7をBODIPY標識脂肪酸を含む培地あるいはPBSで処理後、蛍光顕微鏡あるいはフローサイトメトリーで解析した。その結果、培地よりもPBSでの処理のほうがBODIPY標識脂肪酸の取り込みが促進されることが蛍光顕微鏡あるいはフローサイトメトリーで確認された。また、消化酵素処理したMFGMを添加することにより、マクロファージへのBODIPY標識脂肪酸の取り込みが抑制されたが、消化酵素と処理時間および使用するMFGMの調製方法によって脂肪酸取り込み抑制効果に差が生じることが示唆された。

The effects of CD36 Treg and MFGM are clear, cultured and differentiated. The culture supernatant of T cells (Treg) was added to the culture supernatant of the cells, and the expression of CD36 was increased.また, CD36 を Introduction した Fatty acid take 込 みが MFGM により Suppression されるかどうかを明らかにするため、荍光(BODIPY) identifies fatty acids in the cells and evaluates the method of り込みのvaluation. Tumor cells are commonly cultured using the MULA cell line B16, and the culture supernatant (CM) is recovered. Treg, C57BL/6 マウスの spleen cells から Magnetic プビーズ binding antibody を Use したMACS treatment により Refined したCD4 T cells were cultured in the presence of TGF-β and CD3 antibody/CD28 antibody for 5 days, and the results were obtained. CMで48 time cultivationすることによるTregにおけるCD36の発Now risesをフローサイトメトリーでanalyticsした. The cultivation of コントロール地でしたTregとBIべて、メラノーマCell のCM The MFI (average light intensity) of the Treg is raised and the Treg is raised.このRESULTS から、がんCell culture supernatant でTreg をCultivation することで、Tregの1 cells あたりのCD36発appear が increase したことがconfirmation できた. CD36を高発成するマクロファージ cell line RAW264.7をBODIPY labeled fatty acidをAfter processing with PBS, it was analyzed using a microscopic microscope.そのRESULTS、Pedi よりもPBS でのtreatment のほうがBODIPY logo fatty acid のGET り込みが Promotion されることが荍光鍕Microscope あるいはフローサイトメトリーでConfirmation された.また、Digestive enzyme treatment したMFGMをAdd することにより、マクロファージへのBODIPY logo fatty acid のtake り込みがSuppress されたが、Digestive enzymes and processing time および Use MFGMの preparation method によって Fatty acids are taken out り込み inhibitory effect に 生じることが Show 唆された.