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芳香族アミノ酸特異的輸送系Tの分子クローニングと機能解析

芳香族氨基酸特异性转运系统T的分子克隆及功能分析

基本信息

批准号：
13770049
负责人：
金徒慶
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kyorin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

輸送系T(system T)は、Na^+-非依存的に芳香族アミノ酸を輸送するアミノ酸輸送系であり、種々の細胞で存在が確認されてきたが、その分子実体は明らかにされていなかった。我々は、その分子実体を明らかにすることを目的として、ラット小腸mRNAを材料とし、発現クローニングを行った。ラット小腸由来のmRNAのサイズ分画の結果、2.2〜2.6kbに^<14>C-トリプトファン取り込みのピーク活性を見い出した。その画分よりcDNAライブラリーを作製し、ツメガエル卵母細胞に発現させ、^<14>C-トリプトファン取り込みを指標にスクリーニングすることにより、機能活性を有するクローンを単離した。単離したクローンは、12回膜貫通領域を有すると予想される514アミノ酸からなる新規タンパク質(TAT1:T-type amino acid transporter 1と命名)をコードしていた。TAT1は、トリプトファン、フェニルアラニン、チロシン、L-ドーパ等の芳香族アミノ酸をNa^+-非依存的に輸送する促通拡散型のトランスポーターであり、古典的輸送系Tの性質を備えていた。TAT1を介するトリプトファンの取り込みは、基質アミノ酸のN-メチル体及びN-アセチル体により抑制されたが、メチルエステルによっては抑制されず、TAT1は基質アミノ酸をアニオンとして認識することが示唆された。TAT1は、ラットでは小腸、大腸、胎盤、肝に発現が検出された。特異抗体を作製し免疫組織化学的検討を行ったところ、小腸では、上皮細胞の血管側膜に存在することが明らかになった。TAT1は、芳香族アミノ酸及び類似薬物の上皮輸送における血管側への出口として機能しているものと考えられる。

Transport system T(Na^+-independent aromatic acid transport system T) is the only one that can confirm the existence of a plant cell. We have a lot of information about our molecular biology. The results of mRNA analysis of small intestine origin, 2.2 ~ 2.6kb, showed that the activity of small intestine mRNA was significantly higher than that of small intestine mRNA<14>. The cDNA <14>sequence is controlled by the gene sequence, and the oocyte is produced by the gene sequence. The gene sequence is characterized by the gene sequence and functional activity. The first two layers of the film are called TAT 1: T-type amino acid transporter 1. The second layer of the film is called TAT1:T-type amino acid transporter 1. TAT1 is a Na^+-independent transport system for aromatic acids such as aromatic acids, and aromatic acids. TAT1 is a medium for the selection of N-forms and N-forms of matrix acids. It is a medium for the selection of N-forms and N-forms of matrix acids. TAT1: Small intestine, large intestine, placenta and liver are detected. Immunohistochemical studies of specific antibodies were carried out in the small intestine and in the presence of epithelial cells and vascular membranes. TAT1: Epithelial transport of aromatic acids and similar substances.