LIMキナーゼ遺伝子の心臓発生過程における機能的役割の解析

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<研究の目的>近年、発生工学的手法の発展により、心筋細胞の発生・分化を惹起する増殖因子や転写因子の機能的役割の解析が急速に進んでいるが、サルコメアをはじめとする心筋細胞特異的な分化形態形成メカニズムについては未だ未解明の部分がほとんどである。本研究ではアクチン細胞骨格を制御するLIMキナーゼ(LIMKs)の心臓・心筋細胞の発生・分化過程における機能的役割を解析する事により、心筋細胞の分化形態であるサルコメア形成過程を中心に心臓の発生・分化機構を解明する事が目的である。<研究実績の概要>1.心筋細胞の初代培養系ならびにES細胞による心筋細胞分化系の確立を行い、アデノウイルスベクターを用いた遺伝子導入による遺伝子機能解析の可能性を検討した。2.免疫プロットやRT-PCRにより、心筋細胞の初代培養系ならびにES細胞による心筋細胞分化系におけるLIMKsの発現解析を行った。3.野生型LIMKsならびに変異型LIMKsの発現アデノウイルスベクターの作製を行った。さらに変異型LIMKsの強制発現により、ES細胞の心筋分化(サルコメア形成)に及ぼす影響を検討した。4.種々の変異型LIMKs遺伝子導入により、LIMKsの成熟心筋細胞の機能発現に及ぼす影響についての解析を行った。5.アンギオテンシンII等で代償性心肥大を誘導したin vitroの心筋細胞障害モデルにおけるLIMKsの発現・活性解析を行った。6.種々の心疾患モデル動物におけるLIMKsの発現・活性解析を行った。