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LIMキナーゼ遺伝子の心臓発生過程における機能的役割の解析

LIM激酶基因在心脏发育过程中的功能作用分析

基本信息

批准号：
13770348
负责人：
高橋知之
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
若手研究(B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770348/
关键词：
LIMキナーゼ心臓サルコメアアクチン細胞骨格分化

项目摘要

<研究の目的>近年、発生工学的手法の発展により、心筋細胞の発生・分化を惹起する増殖因子や転写因子の機能的役割の解析が急速に進んでいるが、サルコメアをはじめとする心筋細胞特異的な分化形態形成メカニズムについては未だ未解明の部分がほとんどである。本研究ではアクチン細胞骨格を制御するLIMキナーゼ(LIMKs)の心臓・心筋細胞の発生・分化過程における機能的役割を解析する事により、心筋細胞の分化形態であるサルコメア形成過程を中心に心臓の発生・分化機構を解明する事が目的である。<研究実績の概要>1.心筋細胞の初代培養系ならびにES細胞による心筋細胞分化系の確立を行い、アデノウイルスベクターを用いた遺伝子導入による遺伝子機能解析の可能性を検討した。2.免疫プロットやRT-PCRにより、心筋細胞の初代培養系ならびにES細胞による心筋細胞分化系におけるLIMKsの発現解析を行った。3.野生型LIMKsならびに変異型LIMKsの発現アデノウイルスベクターの作製を行った。さらに変異型LIMKsの強制発現により、ES細胞の心筋分化(サルコメア形成)に及ぼす影響を検討した。4.種々の変異型LIMKs遺伝子導入により、LIMKsの成熟心筋細胞の機能発現に及ぼす影響についての解析を行った。5.アンギオテンシンII等で代償性心肥大を誘導したin vitroの心筋細胞障害モデルにおけるLIMKsの発現・活性解析を行った。6.種々の心疾患モデル動物におけるLIMKsの発現・活性解析を行った。

<Purpose of Research> In recent years, the development of bioengineering techniques and the development and differentiation of cardiac muscle cells have led to rapid analysis of the functions of proliferative factors and writing factors. Differentiation specific to myocardial cells The shape is formed by the unexplained part of the がほとんどである. This study examines the functions of the cardiomyocyte growth and differentiation process of LIMKs (LIMKs).をAnalysis of する事により, differentiation morphology of myocardial cells, であるサルコメア formation process, center of に心臓の発生・differentiation mechanism を clarification of する事がpurpose である. <Overview of Research Achievements> 1. Establishment of the primary culture line of cardiomyocytes and the differentiation line of cardiomyocytes using ES cells行い、アデノウイルスベクターを Use the いた缝子 to introduce the possibility of analyzing the function of the による伝子. 2. Immunotherapy RT-PCR, the primary culture line of myocardial cells, ES cells, and myocardial cell differentiation line, LIMKs, are now analyzed. 3. Wild-type LIMKs are different from heterogeneous LIMKs. The forced development of heterotypic LIMKs and the influence of myocardial differentiation of ES cells have been investigated. 4. The introduction of heterotypic LIMKs into the genetic material was carried out, and the functional expression and influence of LIMKs on mature myocardial cells were analyzed and analyzed. 5. The detection of compensatory cardiac hypertrophy and in vitro myocardial cell dysfunction and the detection and analysis of activity of LIMKs such as Anocon II and others. 6. The appearance and activity analysis of LIMKs of various kinds of heart diseases and animals.