Fanconi貧血遺伝子FANCG欠損細胞株作成によるFANCG遺伝子の機能解析

通过创建范可尼贫血基因 FANCG 缺陷的细胞系对 FANCG 基因进行功能分析

• 批准号: 13770591
• 负责人: 松下 暢子
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kawasaki Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770591/
• 关键词: 相同組み換え; ファンコニ貧血; ジーンターゲティング; DNA修復

1.ニワトリB細胞株DT40からジーンターゲティングによってFANCG、FANCD2、FANCCの欠損細胞を作製した。これらの欠損細胞はいずれも、クロスリンク薬剤感受性などヒトのFA患者細胞と類似した表現型を示し、FAのモデルと考えて適切と思われた。2.以下のアッセイを用いて相同組み換え(HR)におけるFA遺伝子の役割を検討した。(1)ジーンターゲティング効率をいくつかの遺伝子座へのターゲティングベクターを用いて解析すると、FANCGでは数10%程度の軽度の低下、FANCD2では90%以上のはっきりした低下が見られた。(2)染色体にノックインした人工組み換え基質SCneoに制限酵素I-SceI発現によって二重鎖切断を誘導できる。その修復がHRによってただしくおこなわれれば、活性のあるneo耐性遺伝子が再構成され、G418存在下に培養しコロニー形成数をカウントする事によりHRによる修復を測定可能である。Neo耐性コロニー数はFANCG欠損で9分の1、FANCD2欠損で約20分の1に低下していた。このdefectはニワトリFANCG、FANCD2の発現によって正常化可能であった。(3)放射線照射0〜3時間後にM期に入って来る細胞はS期の末期からG2期にかけて照射されたものと考えられる。この時期に行われるDNA二重鎖切断修復は主にHRによるものであることがわかっている。このとき見られる染色体断列をカウントするとFA遺伝子欠損細胞では野生型に比べ明らかに増加が見られた。このデータはFA遺伝子のHRにおける役割と矛盾しないと言える。以上のデータは、FA遺伝子のHR修復における役割を明確に示したはじめてのものである。

1. The control of defective cells of FANCG, FANCD2 and FANCC in DT40 cell line These defective cells are sensitive to FA and similar to FA phenotype. 2. The following is a discussion of the use of the same set of components: (1)FANCG is 10% lower than FANCD2 and 90% lower than FANCD3. (2)Chromosomal DNA sequencing and DNA sequencing are the major factors that inhibit the expression of I-SceI and induce the double lock cleavage. The number of HR cells formed in culture in the presence of G418 was determined. Neo tolerance is 9 points lower than FANCG and 1 point lower than FANCD2. This defect may be caused by FANCG and FANCD2. (3)After 0 ~ 3 hours of radiation exposure, the cells entered M phase and then entered S phase. This period of DNA double lock cut repair is the main HR This is the first time that a chromosome has been broken. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with someone who's been in a relationship with someone. The above is a clear indication of the HR repair process of FA gene.