エストロゲンの血管平滑筋細胞への抗動脈硬化作用に関する分子生物学的解析

雌激素对血管平滑肌细胞抗动脉硬化作用的分子生物学分析

• 批准号: 13770653
• 负责人: 板橋 直樹
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770653/
• 关键词: エストロゲン; 血管平滑筋細胞; アンジオテンシンII; サイミジン; cdk2; PCNA; MAPキナーゼ; Af-1活性; 17β-エストラジオール; アルギニンバソプレシン; ^3H-サイミジン; cdk2抗体; PCNA抗体; 動脈硬化

平成14年研究業績平成13年より、科学研究費補助金にてエストロゲンの抗動脈硬化作用のメカニズムを調査すべく、SDラットの胸部大動脈から血管平滑筋細胞を得、10%牛胎児血清加MEM培地で培養し、実験に用いた。17β-エストラジオール(E2)、血管作動性ホルモン(アンジオテンシンII(AngII)、アルギニンバゾプレシン(AVP))のそれぞれの作用とその相互作用を細胞周期の立場から、^3H-サイミジンの取り込み、ウエスタンブロット法によるサイクリン依存性蛋白cdk2、PCNAにて検討した。また、細胞内メカニズムを調査すべくMAPキナーゼ活性(ERK1/2、p-ERK1/2活性)をウエスタンブロット法により検討した。まず、^3H-サイミジンの取り込みにおいては、E_2はそれ自体また、増殖メディウム添加時において変化は認められなかった。AngII、AVPについては12時間をピークに取り込みの増加を認めた。cdk2、PCNAの活性においては、AngII、AVPは12時間をピークに時間依存的に、また、それぞれ0.1μM、1μMをピークに濃度依存的にその活性の増加を認めた。そして、0.1μM AngII、1μM AVPの12時間後の^3H-サイミジンの取り込みとcdk2、PCNAの活性増加を0.1μM E_2は抑制した。また、MAPキナーゼ活性については、血管作動性ホルモン(AngII、AVP)で活性化されることは有名であるが、E_2を同時添加することでERK1/2活性も、p-ERK1/2活性にも変化は認めなかった。以上のことより、血管作動性ホルモン(AngII、AVP)の細胞増殖傾向をE_2はG1-S期において抑制している可能性が示唆されたが、それは。MAPキナーゼカスケードを介しての作用ではない可能性が推定された。現在は以上の解析結果をふまえ、血管作動性ホルモン(AngII、AVP)にて変化するNF-kBやE2FなどのプロモータにE_2が増殖を抑制する方向に影響を与えている可能性が高くルシフェラーゼ活性法等を用い解析を続けている。

Research results in Heisei 14 years Research results in Heisei 13 years Research grants for the study of anti-atherosclerotic effects of the drug, identification of vascular smooth muscle cells in the thoracic arteries of SD rats, culture of 10% fetal bovine serum plus MEM, and application of the drug. 17β-isoform (E2), vasoactive protein II(AngII), vasoactive protein II (AVP) and their interactions with cell cycle status, 3H-isoform, isoform dependent protein cdk2, PCNA. The activity of ERK1/2 and p-ERK1/2 was investigated by using the method of cell culture. When you add a new product, you will be able to add it to the list. AngII, AVP cdk2, PCNA activity, AngII, AVP activity, 12 time dependent activity, 1 μM activity, 1μM activity, concentration-dependent activity After 12 hours, the activity of CDK2 and PCNA was inhibited by 0.1μM E_2. The activity of ERK1/2 and the activity of p-ERK1/2 were determined by the simultaneous addition of E_2 and MAP. The above results indicate that the possibility of inhibition of vascular motility (AngII, AVP) in cell proliferation tendency in E_2-G1-S phase is opposite. MAP is the most probable way to determine the effect. Now, the above analysis results show that the vascular activation method (AngII, AVP) can be used to analyze the effects of NF-kB, E2F, E2F, E