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マイトマイシンCの細胞致死作用の温熱による増強に及ぼすp53遺伝子型の影響

p53基因型对热疗增强丝裂霉素C细胞杀伤作用的影响

基本信息

批准号：
14770450
负责人：
金朝暉
金额：
$ 1.34万
依托单位：
University of Fukui (2004)福井医科大学 (2002-2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770450/
关键词：
温熱療法化学療法温熱化学療法 p53 アポトーシス Hsp72 細胞周期

项目摘要

【目的】我々はp53欠損ヒト肺癌H1299細胞に正常型・p53発現ベクターを導入したH1299/wtp53細胞、変異型p53発現ベクターを導入したH1299/mp53細胞および対照としてベクターのみを導入したH1299/neo細胞を用い、42℃加温とマイトマイシンC(MMC)との併用処理により、いずれの細胞においても顕著な温熱化学増感効果が認められることから、その温熱化学増感効果は癌抑制遺伝子p53非依存的に誘発されることを報告した。本研究は、これらの知見の普遍性について他の癌細胞株を用いて検討することを目的とした。【材料と方法】1.p53欠損ヒト肝癌Hep3B細胞を用いた。2.温熱単独処理は、フラスコを42℃に設定した恒温槽に浸漬して行った。3.MMC単独処理は、最終濃度0.05μg/mlのMMCを培養液に添加し、37℃で処理した。4.併用処理は、上記MMC処理を42℃で行った。5.各処理の殺細胞効果はコロニー形成法により解析した。6.細胞死型の解析は、蛍光色素acridine orange/ethidium bromide二重染色蛍光顕微鏡観察法により行った。7.Hsp72の蓄積動態の解析は、抗Hsp72抗体を用いたWestern blotting法により行った。【結果と考察】1.この細胞の42℃単独加温におけるLD50は2時間であり、4時間以降に温熱耐性の誘導が認められた。この濃度のMMC単独処理ではほとんど殺細胞効果を示さなかった。また42℃加温とMMCとの併用処理では、殺細胞効果の増強がほとんど認められず、温熱耐性誘導の抑制も示されなかった。2.42℃加温単独およびMMCとの併用処理において、apoptosisの誘導はほとんど認められなかったが、顕著なnecrosisの誘導が認められた。42℃加温によるnecrosis誘導は、MMCの同時併用処理により増強されなかった。3.42℃加温によるHsp72の蓄積誘導はMMCの同時併用により抑制されなかった。今後、Hep3B細胞に正常型あるいは変異型p53遺伝子を導入し、MMCによる温熱増感効果のmechanismについて検討する。

[Objective] To investigate the effects of p53 deficiency on lung cancer H1299 cells, normal p53 expression, p53 heteromorphic p53 expression, H1299/mp53 cells and H1299/neo cells. In the middle of the cell, there is a report on the effect of thermochemical induction on cancer suppression. The aim of this study is to investigate the universality of this knowledge and the use of other cancer cell lines. [Materials and Methods] 1. p53 Deficiency in Hep3B Cells. 2. Temperature treatment: 42 ° C. Temperature setting: 42 ° C. Temperature setting: 42 ° C. 3. MMC treatment alone, final concentration of 0.05μg/ml MMC added to the culture medium, 37℃ treatment. 4. and treated with MMC at 42℃. 5. The analysis of the cell-killing effect of each treatment was carried out by the method of formation. 6. Cell death pattern analysis, acridine orange/ethidium bromide double staining, microscopy 7. Analysis of accumulation dynamics of Hsp72 and anti-Hsp72 antibodies were performed by Western blotting. [Results] 1. The cells were heated to 42℃ for 2 hours, and then heated to 40 ℃ for 4 hours. This concentration of MMC alone can cause cell death. The combination of 42℃ heating and MMC treatment increased the cytocidal effect and inhibited the thermotolerance induction. 2.42℃ heating alone and MMC in combination treatment, apotosis induction, necrosis induction 42℃ heating necrosis induction, MMC and simultaneous treatment 3.42℃ warming induced accumulation of Hsp72 and simultaneous inhibition of MMC. In the future, Hep3B cells will be introduced into normal or abnormal p53 genes, and the mechanism of thermosensitive effects will be discussed.