tumstatinによる早期糖尿病性腎症進展抑制の試み及びその分子作用機序の解析

肿瘤抑素抑制早期糖尿病肾病进展的尝试及其分子机制分析

• 批准号: 14770550
• 负责人: 前島 洋平
• 金额: $ 3.07万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770550/
• 关键词: 糖尿病性腎症; 血管新生; VEGF; angiopoietin-1; angiopoietin-2; tumstatin; nephrin; streptozotocin誘発糖尿病; CD31

現在、我が国において維持透析患者の原因疾患では、糖尿病性腎症が第一位でありその進展機序の解明およびそれに基づいた新たな腎症進展抑制治療法の開発は、腎臓内科学において重要な課題である。糖尿病性腎症早期の段階で、糸球体濾過面積が増加することが報告されているが、この時新たな毛細血管の形成・既存の血管のわずかなelongationといった「血管新生」様の現象が認められる。tumstatinは血管基底膜構成細胞外マトリックスであるIV型collagenのα3-chainのNC1 domainで血管新生を抑制する。tumstatin(244アミノ酸)の血管新生抑制作用の由来するT8-peptideをstreptozotocin誘発糖尿病マウスモデルに投与したところ、腎重量/体重比の増加、糸球体過剰濾過、アルブミン尿、糸球体肥大、糸球体細胞数の増加が有意に抑制された。F4/80抗体を用いた検討により、糸球体内のmonocyte/macrophage浸潤を評価したところ、F4/80陽性細胞数が糖尿病群において増加していたが、tumstatin peptide投与群において減少していた。さらに、CD31陽性の糸球体係蹄数の増加はtumstatin投与群にて有意に抑制されていた。以上より、糖尿病性腎症早期に認められた血管新生様の変化がtumstatin peptide投与により抑制され、治療効果が認められた。次に、血管新生誘導因子であるVEGFや血管安定化に関与するangiopoietin-1、そしてそのantagonistでありVEGF存在下にて血管新生を誘導するangiopoietin-2等の発現変化を検討した。摘出腎皮質部より抽出したcell lysateを用い、immunoblotを行った。糖尿病群にて、VEGF発現は対照群に比して有意に増加したが、tumstatin peptide投与(2もしくは3週間)により、その増加が有意に抑制された。同様に糖尿病群にて、angiopoietin-2発現は対照群に比して有意に著増を認めたが、tumstatin peptide投与により、その増加が有意に抑制された。angiopoietin-1の発現は糖尿病群にて変化を認めず、tumstatin peptide治療群においても特に変化はなかった。糸球体上皮細胞(podocyte)間のslit膜は糸球体濾過調節に重要な役割を果たすが、その構成蛋白の一つであるnephrinの発現が糖尿病性腎症において低下することが報告されている。また、近年の報告にて糸球体内皮細胞とpodocyteとの相互作用が示唆されているが、tumstatin peptide治療群におけるnephrinの発現変化を検討した。糖尿病群にて、nephrin mRNA発現は対照群に比して有意に低下し、糸球体上皮細胞における蛋白発現は対照群のpodocyteパターンに比して変化を認めた。tumstatin peptide投与により、nephrin mRNA発現の増加、組織学的蛋白発現パターンの改善を認めた。tumstatin peptideがVEGF, angiopoietin-2等の発現を調節することにより、血管新生様変化が抑制され、さらに間接的にnephrin発現の回復及びアルブミン尿の減少を認めたものと考えられた。(以上の結果を現在投稿中である。)また、培養糸球体内皮細胞を用いた検討を現在行っている。

Now, I'm が に お い て maintaining dialysis patients の cause disease で は, diabetic kidney disease が first で あ り そ の progress machine sequence の interpret お よ び そ れ に base づ い た new た な kidney disease progress suppression therapy の open 発 は is crucial, kidney internal medicine に お い て important topic な で あ る. Diabetic kidney disease early の Duan Jie で, si sphere filtration area が raised す る こ と が report さ れ て い る が, こ の stylish た な capillary の formation, existing の vascular の わ ず か な elongation と い っ た "angiogenesis" others の phenomenon が recognize め ら れ る. tumstatin を vascular basement membrane formation extracellular トリッ スである スである type IV collagen <s:1> α3-chain <s:1> NC1 domainで angiogenesis を inhibition する. Tumstatin (244 ア ミ ノ acid) の angiogenesis inhibition の origin す る T8 - peptide を streptozotocin induced diabetes 発 マ ウ ス モ デ ル に cast with し た と こ ろ, kidney weight/body weight than の rights added, si sphere turning filtration, ア ル ブ ミ ン urine, si sphere hypertrophy, si ball somatic cell count の add が have rights The intention に inhibits された. F4/80 antibody を い た beg に 検 よ り, si sphere の monocyte/macrophage infiltration を review 価 し た と こ ろ, F4/80 positive cells number が diabetes group に お い て raised plus し て い た が, tumstatin cast with group of peptide に お い て reduce し て い た. Youdaoplaceholder0, an increase in the number of hooves of the cd31-positive statin system <s:1>, and the にて tumstatin group にて intentionally に inhibited されて た た た. The above よ よ, the early stage of diabetic nephropathy に is recognized as められた angiogenic <s:1> changes がtumstatin peptide administration によ に inhibits され, and the therapeutic effect が is recognized as められた. に, angiogenesis factor で あ る VEGF や vascular stabilization に masato and す る uncomplicated 1, そ し て そ の antagonist で あ り presence of VEGF に て angiogenesis induced す を る uncomplicated 2 の 発 now - the を beg し 検 た. Extract the renal cortex よ よ extract the たcell lysateを and perform った with よ and immunoblotを. Diabetes group に て, VEGF 発 は now according to the group of seaborne に than し て intentionally に raised plus し た が, tumstatin cast with peptide (2 も し く は 3 weeks) に よ り, そ の raised が requirement by deliberately に inhibit さ れ た. With others in に diabetes group に て, uncomplicated 2 発 は now according to the group of seaborne に than し て intentionally に the rights を recognize め た が, tumstatin peptide cast with に よ り, そ の raised が requirement by deliberately に inhibit さ れ た. angiopoietin-1 is characterized by にて changes in the <s:1> diabetic group を and めず in the tumstatin peptide therapeutic group にお, て, <s:1> and に changes in な な and った った. Si sphere between epithelial cell (podocyte) の は si sphere slit membrane filtration important な "を cut fruit に た す が, そ の constitute a protein の つ で あ る nephrin の 発 が diabetic kidney disease now に お い て low す る こ と が report さ れ て い る. ま た, in recent years, の report に て si sphere endothelial cells と podocyte と の が interaction in stopping さ れ て い る が, tumstatin peptide treatment group に お け る nephrin の 発 now - the を beg し 検 た. Diabetes group に て, nephrin mRNA 発 は now according to the group of seaborne に than し て intentionally に し, si sphere epithelial cells に お け る protein 発 は now according to the group of seaborne の podocyte パ タ ー ン に than し て variations change を recognize め た. tumstatin peptide administration によ, nephrin mRNA occurrence <s:1> increased, histological protein occurrence パタ <s:1> <s:1> improved を recognized めた. Tumstatin peptide が VEGF, uncomplicated 2 の 発 now を adjust す る こ と に よ り, angiogenesis, others - the が inhibit さ れ, さ ら に indirect に nephrin 発 の reply now and び ア ル ブ ミ ン urinary の を recognize め た も の と exam え ら れ た. (The above <s:1> result を is now in submission である.) Youdaoplaceholder0, culture of spheroid endothelial cells を use また た検 to obtain を. Now line って る る る.

项目成果

Zeisberg, M: "Renal Fibrosis : Extracellular Matrix Microenvironmen Regulates Migratory Behavior of Activated Tubular Epithelial Cells"Am J Pathol. 160(6). 2001-2008 (2002)

Zeisberg, M：“肾纤维化：细胞外基质微环境调节激活的管状上皮细胞的迁移行为”Am J Pathol。

Kitamura, S: "Transforming growth factor-beta 1 induces vascular endothelial growth factor expression in murine proximal tubular epithelial cells."Nephron Exp Nephrol. 95(2). e79-e86 (2003)

Kitamura，S：“转化生长因子-β1 诱导小鼠近端肾小管上皮细胞中血管内皮生长因子的表达。”Nephron Exp Nephrol。