HMG-CoA還元酵素阻害剤の抗酸化作用におけるパラオキソナーゼの役割について

对氧磷酶在 HMG-CoA 还原酶抑制剂抗氧化作用中的作用

• 批准号: 14770602
• 负责人: 有井 薫
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kochi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770602/
• 关键词: HMG-CoA還元酵素阻害剤; paraoxonase; メバロン酸; ファルネシルピロリン酸; Ras; 抗酸化作用; pleiotropic effect; HMG-Coa還元酵素阻害剤; ゲラニルゲラニルピロリン酸

ヒト血中paraoxonase(PON1)は高比重リポ蛋白粒子上に存在し、動脈硬化の進展因子である低比重リポ蛋白の酸化を抑制することが知られている。一方、HMG-CoA還元酵素阻害剤(statin)にはコレステロール低下作用以外の抗動脈硬化作用(pleiotropic effect)を有することが注目されており、その1つとして抗酸化作用が推定されている。我々は、平成14年度の研究で、statinがPON1転写活性を亢進させること、メバロン酸カスケード代謝産物であるメバロン酸(MV)、ファルネシルピロリン酸(FPP)を同時添加するとstatinのPON1転写活性亢進作用が解除されることを明らかにした。そこで、本年度は、statinのもつPON1転写活性亢進作用の機序をさらに詳しく検討(A)するとともに、statinがPON1蛋白産生に与える影響についてもあわせて検討した。(A)statinのPON1転写活性亢進機序についての検討PON1遺伝子上流プロモーター領域を組み込んだルシフェラーゼ発現ベクターを培養HepG2細胞にトランスフェクションした後、farnesyl transferase阻害剤(FTI-277)、geranylgeranyl transferase阻害剤(GGTI-287)を添加し、PON1転写活性に与える影響をルシフェラーゼアッセイにて検討した。1.FTI-277添加;用量依存性にPON1転写活性は亢進し、FTI-277 20μMでは、Pitavastatin 50μMと同程度のPON1転写活性亢進を認めた2.GGTI-286添加;PON1転写活性に影響は認められなかった以上の検討と平成14年度の研究結果より、HMG-CoA還元酵素阻害剤のもつPON1転写活性亢進作用の機序は、MV、FPPを介し、Rasシグナルと関係していることを証明した。(B)statinのPON1蛋白産生に与える影響についての検討培養正常ヒト肝細胞をpitavastatinで24時間刺激した後、PON1蛋白産生をウエスタンブロッティング法にて検討した。1.pitavastatin 0.01μMから1μMの濃度で、PON1蛋白産生は亢進していた以上の検討にて、statinが培養正常ヒト肝細胞にてPON1蛋白産生を亢進させることを証明した。

Paraoxonase(PON1) in the blood is present on high specific gravity protein particles, a progression factor in atherosclerosis, and an inhibition of acidification of low specific gravity protein. On the one hand, HMG-CoA reducing enzyme inhibitor (statin) has anti-atherosclerotic effect in addition to its anti-acidification effect. In our study conducted in 2014, we found that the increase in PON1 activity of statin and the simultaneous addition of its metabolites, such as metanoic acid (MV) and metanoic acid (FPP), resulted in the elimination of the increase in PON1 activity of statin. This year, the mechanism of PON1 protein hyperactivity caused by statin was discussed in detail. (A) To investigate the effects of farnesyl transferase inhibitor (FTI-277) and geranyl transferase inhibitor (GGTI-287) on the PON1 gene up-stream activity in HepG2 cells cultured in vitro. 1. FTI-277 added; Dose-dependent increase in PON1 writing activity, FTI-277 at 20μM, Pitavastine at 50μM and increase in PON1 writing activity to the same extent were identified. 2. GGTI-286 was added. The effect of PON1 writing activity on PON1 writing activity was identified. The results of the 14-year study showed that the mechanism of PON1 writing activity increase by HMG-CoA reducing enzyme inhibitor was mediated by MV, FPP and Ras. (B) PON1 protein production in statin and its influence on culture of normal hepatocytes after 24-hour stimulation with statin 1. The increase of PON1 protein production in cultured normal hepatocytes was demonstrated by the concentration of pitavastatin from 0.01μ M to 1μM.