骨芽細胞増殖における蛋白質脱リン酸化酵素による核内蛋白の調節

成骨细胞增殖中蛋白质去磷酸化酶对核蛋白的调节

基本信息

批准号：
14771004
负责人：
森本景之
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771004/
关键词：
蛋白質脱リン酸化酵素 RNAi PKR eIF-2 Apoptosis 骨芽細胞 Nucleolin 核内蛋白アポトーシス

项目摘要

今回の申請は蛋白質脱リン酸化酵素1型(PP1)のアイソフォームであるPP1δがNucleolinを脱リン酸化反応の基質としているか、また蛋白質脱リン酸化反応が骨芽細胞においてどのような役割を果たしているかを解明することが目的である。PP1と核内蛋白が骨芽紙胞においてどのような相互関係を持つか検討し、骨芽細胞の増殖およびアポトーシスを蛋白質脱リン酸化の観点より解明する。1.培養細胞に二本鎖RNAを導入し、RNAiを生じさせPP1δの発現を抑制した。その際に他のPP1アイソフォームの発現に影響を与えないこと、細胞の形態的な変化は生じないことを明らかとした。これら結果の一部はJ Enzyme Inhib Med Chem誌に発表し、残りについては現在論文投稿準備中である。2.正常増殖状態での骨芽細胞においてNucleolinとPP1δは核小体に局在し、互いに結合していた。また細胞周期進行を阻害した細胞ではこれら分子の発現量が変化することおよびNucleolinのリン酸化状態が変化することを明らかとした。これら結果の一部はJ Histochem Cytochem誌に発表し、残りについては現在論文投稿準備中である。3.蛋白質脱リン酸化酵素をオカダ酸により阻害するとRANKLが発現すること、NF-kBを介してFas, FasLが発現すること、PKR-eIF2α経路が活性化され蛋白質新合成が停止すること、またこれらの経路がLPSによる炎症反応に関与すること、さらに最終的にアポトーシスが生じることを明らかとした。これらの結果の一部はBiomed Res誌、Oral Oncol誌およびJ Biochem誌に発表した。残りの結果については現在論文投稿中である。以上に示すように、現在までにNucleolinとPP1の相互関係を明らかとし、さらに細胞の転写、翻訳、炎症応答、アポト-シスにおける蛋白質脱リン酸化の関与を明らかとする結果を得ている。

本应用的目的是阐明PP1δ是蛋白质去磷酸化酶1型（PP1）的同工型是否使用核仁素作为去磷酸化反应的底物以及蛋白质去磷酸化反应的作用，在成骨细胞中起着什么作用。我们研究了成骨细胞中PP1与核蛋白之间的关系，并从蛋白质去磷酸化的角度阐明了成骨细胞的增殖和凋亡。 1。双链RNA被引入培养细胞中以产生RNAi并抑制PP1Δ的表达。据表明，它不影响其他PP1同工型的表达，并且细胞没有形态学变化。其中一些结果已发表在J酶抑制Med Chem杂志上，其余的目前都在准备提交论文。 2。核醇蛋白和PP1Δ定位于核仁蛋白，并在正常增殖中彼此结合成骨细胞。还表明，这些分子的表达水平发生变化和抑制细胞周期进展的细胞中核苷变化的磷酸化状态。其中一些结果已发表在J Histochem Cytochem中，其余的目前都在准备提交论文。 3。据表明，用冈田酸抑制蛋白质去磷酸化酶会导致RANKL表达，FAS和FASL通过NF-KB表达，即激活PKR-EIF2α途径，并停止PKR-EIF2α途径，并且这些途径与lps和APOPT有关。其中一些结果发表在Biomed Res，口服Oncol和J Biochem中。其余结果目前正在提交。如上所示，迄今为止已经揭示了核醇蛋白和PP1之间的关系，并且已经揭示了细胞转录，翻译，炎症反应以及蛋白质去磷酸化的参与。