骨芽細胞増殖における蛋白質脱リン酸化酵素による核内蛋白の調節

成骨细胞增殖中蛋白质去磷酸化酶对核蛋白的调节

• 批准号: 14771004
• 负责人: 森本 景之
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771004/
• 关键词: 蛋白質脱リン酸化酵素; RNAi; PKR; eIF-2; Apoptosis; 骨芽細胞; Nucleolin; 核内蛋白; アポトーシス

今回の申請は蛋白質脱リン酸化酵素1型(PP1)のアイソフォームであるPP1δがNucleolinを脱リン酸化反応の基質としているか、また蛋白質脱リン酸化反応が骨芽細胞においてどのような役割を果たしているかを解明することが目的である。PP1と核内蛋白が骨芽紙胞においてどのような相互関係を持つか検討し、骨芽細胞の増殖およびアポトーシスを蛋白質脱リン酸化の観点より解明する。1.培養細胞に二本鎖RNAを導入し、RNAiを生じさせPP1δの発現を抑制した。その際に他のPP1アイソフォームの発現に影響を与えないこと、細胞の形態的な変化は生じないことを明らかとした。これら結果の一部はJ Enzyme Inhib Med Chem誌に発表し、残りについては現在論文投稿準備中である。2.正常増殖状態での骨芽細胞においてNucleolinとPP1δは核小体に局在し、互いに結合していた。また細胞周期進行を阻害した細胞ではこれら分子の発現量が変化することおよびNucleolinのリン酸化状態が変化することを明らかとした。これら結果の一部はJ Histochem Cytochem誌に発表し、残りについては現在論文投稿準備中である。3.蛋白質脱リン酸化酵素をオカダ酸により阻害するとRANKLが発現すること、NF-kBを介してFas, FasLが発現すること、PKR-eIF2α経路が活性化され蛋白質新合成が停止すること、またこれらの経路がLPSによる炎症反応に関与すること、さらに最終的にアポトーシスが生じることを明らかとした。これらの結果の一部はBiomed Res誌、Oral Oncol誌およびJ Biochem誌に発表した。残りの結果については現在論文投稿中である。以上に示すように、現在までにNucleolinとPP1の相互関係を明らかとし、さらに細胞の転写、翻訳、炎症応答、アポト-シスにおける蛋白質脱リン酸化の関与を明らかとする結果を得ている。

The present application is for the protein deacidification enzyme type 1 (PP1) and the protein deacidification enzyme type 1 (PP1). The relationship between PP1 and nuclear proteins in bone bud cells is discussed, and the relationship between proliferation and protein deacidification in bone bud cells is clarified. 1. The expression of PP1 δ was inhibited by RNA introduction and RNAi production in cultured cells. In addition, the development of PP1 is affected by the change of cell morphology. A part of the results of this paper is in preparation for submission. 2. In the normal growth state, the nucleoli and PP1 δ of bone bud cells are in the middle and in the middle. Cell cycle progression is impaired by changes in molecular production and changes in the state of nuclein acidification. The results of this paper are in preparation for submission. 3. Protein deacidifying enzymes are activated to inhibit RANKL production, NF-kB mediated Fas, FasL production, PKR-eIF2α pathway activation to inhibit protein neosynthesis, LPS mediated inflammatory response, and finally, LPS production. Some of the results were Biomed Res, Oral Oncol and J Biochem. The results of the residual now in the paper submission The above results show that the relationship between Nucleolin and PP1 is clear, and the relationship between protein deacidification and protein deacidification is clear.

项目成果

Morimoto, H.: "Double-stranded RNA mediates selective gene silencing of protein phosphatase type 1 delta isoform in HEK-293 cells."Journal of Enzyme Inhibition & Medical Chemistry. (in press).

Morimoto, H.：“双链 RNA 介导 HEK-293 细胞中 1 型蛋白磷酸酶 delta 亚型的选择性基因沉默。”酶抑制杂志

Fujita, M.: "Okadaic acid stimulates expression of Fas receptor and Fas ligand by activation of nuclear factor kappa-B in human oral squamous carcinoma cells."Oral Oncology. 40(2). 199-206 (2004)

Fujita, M.：“冈田酸通过激活人口腔鳞状癌细胞中的核因子 kappa-B 来刺激 Fas 受体和 Fas 配体的表达。”口腔肿瘤学。

Okamura, H.: "Transcription factor NF-Y regulates mdr1 expression through binding to inverted CCAAT sequence in drug-resistant human squamous carcinoma cells."International Journal of Oncology. (in press).

Okamura, H.：“转录因子 NF-Y 通过与耐药人鳞状癌细胞中的反向 CCAAT 序列结合来调节 mdr1 表达。”国际肿瘤学杂志。

Sasaki E.: "Transblot and cytochemical identification of avidin-interacting proteins in mitochondria of cultured cells."Histochemistry and Cell Biology. 120(4). 327-333 (2003)

Sasaki E.：“培养细胞线粒体中亲和素相互作用蛋白的转印迹和细胞化学鉴定。”组织化学和细胞生物学。

Morimoto, H.: "Okadaic acid induces apoptosis through double-stranded RNA-dependent protein kinase/eukaryotic initiation factor-2α pathway in human osteoblastic MG63 cells."Journal of Biochemistry. (in press).

Morimoto, H.：“冈田酸通过双链 RNA 依赖性蛋白激酶/真核起始因子 2α 途径诱导人成骨细胞 MG63 细胞凋亡。”《生物化学杂志》（出版中）。