ヒト血管内皮細胞において局所麻酔薬が一酸化窒素産生に与える影響

局麻药对人血管内皮细胞一氧化氮生成的影响

• 批准号: 14771142
• 负责人: 高石 和美
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771142/
• 关键词: 一酸化窒素; 局所麻酔薬; ヒト大動脈内皮細胞; 血管内皮細胞

培養ヒト大動脈内皮細胞(HAEC)をアセチルコリンおよびIL-1βで刺激し、一酸化窒素合成酵素(NOS)活性に対する局所麻酔薬の影響を検索した。HAECにおいてアセチルコリンは内皮型NOS(eNOS)を活性化し、IL-1βは誘導型NOS(iNOS)を活性化した。NO産生量の比較にはNO測定キットを使用し、2.3-Diaminonaphthaleneを用いてNOの代謝産物であるnitrateおよびnitriteの量を測定した。その結果、局所麻酔薬のプロカインはHAECにおいてeNOSあるいはiNOS活性を抑制した(p<0.01)。リドカインはeNOSあるいはiNOS活性に対して影響を及ぼさなかった。また、eNOSは細胞膜のカベオレに存在するが、活性型は細胞質に遊離する。そのため細胞膜蛋白および細胞質蛋白を抽出しウェスタンブロット法によりeNOS蛋白の局在に対する局所麻酔薬の影響を検索した。その結果、eNOS蛋白の細胞質への遊離を局所麻酔薬は抑制する傾向を示したため現在更なる検索を続行している。さらに、カベオレ内のeNOSはカベオリンを介してアルギニントランスポーター1と結合している。アルギニンはNOSの基質であり細胞外からのアルギニン供給はNOS活性に影響を及ぼすとされている。そのため高速液体クロマトグラフィーによってアルギニン輸送量を測定し、局所麻酔薬が血管内皮細胞へのアルギニン輸送に与える影響について検索した。その結果、局所麻酔薬はアルギニン輸送を抑制する可能性が示唆された。

用乙酰胆碱和IL-1β刺激培养的人主动脉内皮细胞（HAEC），以搜索局部麻醉剂对一氧化氮合酶（NOS）活性的影响。在HAEC中，乙酰胆碱激活内皮NOS（ENOS），而IL-1β激活了诱导的NOS（Inos）。为了比较没有生产，使用2.3-二氨基萘二苯乙烯使用NO测量套件来测量NO代谢物，硝酸盐和亚硝酸盐的量。结果，局部麻醉剂抑制了HAEC中的eNOS或INOS活性（p <0.01）。利多卡因对eNOS或iNOS活性没有影响。此外，eNOS存在于细胞膜的小caveolle中，但活性形式被释放到细胞质中。因此，提取细胞膜蛋白和细胞质蛋白，并通过蛋白质印迹搜索局部麻醉剂对eNOS蛋白质定位的影响。结果，局部麻醉剂显示出抑制eNOS蛋白在细胞质中释放的趋势，目前正在继续进行进一步的搜索。此外，小屋内的eNOS通过小窝蛋白与精氨酸转运蛋白1结合。精氨酸是NOS的底物，据说从细胞外部的精氨酸供应会影响NOS活性。因此，通过高性能液相色谱法测量精氨酸的转运量，并搜索局部麻醉剂对精氨酸转运到血管内皮细胞的影响。结果表明，局部麻醉剂可能会抑制精氨酸的转运。